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河南泛素化修飾蛋白質組學服務

來源: 發布時間:2022-01-08

蛋白質翻譯后修飾組學:血漿蛋白糖基化修飾分析:蛋白質糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質上的過程,是一種常見的蛋白質翻譯后修飾。分泌的細胞外蛋白常被糖基化,糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白。血漿中的蛋白質包括維持機體正常生理狀態的蛋白質和機體分泌、滲漏、脫落的蛋白質,其中不乏存在一些糖基化蛋白質。而蛋白質糖基化修飾不只影響蛋白質的空間構象、生物活性、運輸和定位,而且在分子識別、細胞通信、信號轉導等特定生物過程中發揮著至關重要的作用。因此對血漿蛋白糖基化進行分析,有助于研究血漿蛋白的生理功能等。各種蛋白質翻譯后修飾在信號通路和網絡中發揮著重要的作用。河南泛素化修飾蛋白質組學服務

蛋白質翻譯后修飾:蛋白質的翻譯后修飾通過可逆的共價鍵將小分子或蛋白質與底物蛋白質上特定的氨基酸結合,調控著底物的酶活性、功能以及三級結構的變化。各種蛋白質翻譯后修飾在信號通路和網絡中發揮著重要的作用,翻譯后修飾系統的紊亂將導致一系列疾病的發生。通過實驗的方法鑒定蛋白質翻譯后修飾的位點需要耗費大量的資金和時間,并且酶反應的優化常常難以實現。而計算的方法則能夠快速、準確的預測酶特異性的底物蛋白質及其修飾位點。深圳蛋白質泛素化修飾組學分析方法蛋白質磷酸化修飾的免疫印跡技術優點:檢測特異性高。

蛋白質翻譯后修飾組學:翻譯后修飾自下而上分析策略:自下而上蛋白質組學是一種基于肽段分析的技術。對于不同類型的翻譯后修飾,具體的分析策略存在差異。蛋白質的糖基化具有異質性。不同的糖鏈可以連接到同一位點上,不同位點可以連接到同一蛋白質上的不同糖鏈上。糖基化的異質性嚴重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類型的相同蛋白質,在電泳上會出現分散的條帶,導致信號分散。此外,對低豐度蛋白質的識別性差導致糖蛋白在色譜圖中分離不佳,質譜中有一簇分子量不準確的分辨不清的峰。目前,蛋白糖基化研究的主要策略是利用現有的技術體系對糖基化蛋白的糖基化肽段進行分離和富集,消除糖基化的異質性及其對質譜的影響,標記糖基化位點。

質譜分析乙酰化蛋白質組:質譜分析技術可以對蛋白質組中的乙酰化蛋白進行鑒定、乙酰化位點定位以及定量。當質譜用于乙酰化定量蛋白組研究中時,因為乙酰化蛋白質在生物樣本中含量低、動態范圍廣,需要先對乙酰化肽段進行富集,然后再對富集得到的乙酰化肽段樣品進行定量分析。質譜定量乙酰化蛋白組采用肽段預分離降低高豐度蛋白的影響,結合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙酰化的肽段,從而實現大規模乙酰化的鑒定及定量。為了鑒定和定量更多的乙酰化肽段,在酶切過程中還可使用多種不同的酶對蛋白樣品進行酶切。常見的蛋白質翻譯后修飾包括泛素化。

蛋白質乙酰化修飾定義:蛋白質在細胞中經過翻譯后,到被運輸到相應的細胞器并且發生特定的生物學作用前會經過很重要的一步加工,那就是蛋白質翻譯后修飾加工。蛋白質翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質的活性、定位或功能。通過蛋白質翻譯后修飾也進一步增加了細胞通路機制和生命活動的多樣性和復雜性。常見的蛋白質翻譯后修飾包括磷酸化,乙酰化,糖基化,泛素化等。蛋白質乙酰化修飾,顧名思義指的就是在蛋白質原有基礎上面嫁接上乙酰化基團。在細胞中,乙酰化修飾的反應由乙酰基轉移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙酰基轉移并添加在蛋白質賴氨酸殘基上。在早期的研究中,乙酰化修飾一直被認為是真核細胞所特有的一種翻譯后修飾,直到后來研究發現原核細胞中年也存在著蛋白質乙酰化修飾。所以,乙酰化修飾是原核和真核生物所共有的一種翻譯后修飾類型。在早期的研究中,乙酰化修飾一直被認為是真核細胞所特有的一種翻譯后修飾。四川蛋白質翻譯后修飾組學分析方法

蛋白磷酸化修飾過程是通過蛋白激酶催化,將磷酸基團從ATP轉移到多肽底物的絲氨酸、或酪氨酸殘基上。河南泛素化修飾蛋白質組學服務

蛋白質學組翻譯后修飾分析自中而下分析策略:自中而下的蛋白質組學技術可用于組蛋白修飾的分析。樣品制備與普遍使用的自下而上的分析策略相同,直到得到純化的組蛋白。提取組蛋白后,用GluC進行消化。然后用弱陽離子交換/親水相互作用色譜(WCX-HILIC)與配備電子轉移解離(ETD)的高分辨率質譜聯機聯用,對樣品進行理想的分離。譜識別可以用傳統的軟件進行,但是由于估計適當的錯誤發現率的問題,需要對結果進行過濾。自上而下的技術可以直接引入完整的蛋白質并在串聯質譜儀上對其進行片段化,不需要蛋白質水解消化。目前,有兩種完全分離蛋白質的方法:離線和在線。前者用四維分離法,后者用WCX-HILIC。河南泛素化修飾蛋白質組學服務

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