冷凍電子顯微鏡技術(shù)步驟之樣品制備:用于冷凍電鏡研究的生物樣品必須非常純凈。生物樣品是在高真空的條件下成像的,所以樣品的制備既要能夠保持本身的結(jié)構(gòu)又能抗脫水、電子輻射。現(xiàn)在普遍采用的方法是通過(guò)快速冷凍使含水樣品中的水處于玻璃態(tài),也就是在親水的支持膜上將含水樣品包...
冷凍電子顯微鏡技術(shù)中單顆粒重構(gòu)技術(shù):該技術(shù)也叫做單顆粒分析,主要適用于結(jié)構(gòu)具有全同性的生物大分子的結(jié)構(gòu)解析,蛋白質(zhì)的分子量通常要求在100KD以上,在顆粒數(shù)目足夠多的情況下,理論上其分辨率可以達(dá)到原子水平。該方法的圖像處理和三維重構(gòu)計(jì)算過(guò)程如下:從原始的電鏡照...
冷凍電鏡技術(shù)中的單顆粒分析法(Singleparticleanalysis,SPA):?jiǎn)晤w粒技術(shù)獲得投影的具體方法:制備很多具有同樣結(jié)構(gòu)的大分子樣品,將其進(jìn)行分散冷凍后進(jìn)行隨機(jī)的投影拍照,再通過(guò)計(jì)算模擬測(cè)定角度,對(duì)具有相同角度的粒子進(jìn)行組合,突出其中更特殊、更...
冷凍電子顯微技術(shù)學(xué)解析生物大分子及細(xì)胞結(jié)構(gòu)的中心是透射電子顯微鏡成像,包括樣品制備、圖像采集、圖像處理及三維重構(gòu)等幾個(gè)基本步驟。三維重構(gòu):數(shù)據(jù)處理的較終目的是為了獲得生物樣品的三維質(zhì)量密度圖,由二維圖像推知三維結(jié)構(gòu)的方法即三維重構(gòu)。其理論原理是在1968年由D...
冷凍電鏡技術(shù)基本原理之三維冷凍電鏡技術(shù):樣品經(jīng)過(guò)在液氮中的冷凍固定,使得生物大分子中的H2O分子以玻璃態(tài)的形式存在,保持低溫,將樣品放入顯微鏡,高度相干的電子作為光源從上面照射下來(lái),透過(guò)樣品和附近的冰層,受到散射,利用探測(cè)器和透鏡系統(tǒng)把散射的信號(hào)成像記錄下來(lái),...
冷凍電鏡技術(shù)解析結(jié)構(gòu)的一般流程是怎樣的?對(duì)樣品的要求是什么?冷凍電鏡解析蛋白結(jié)構(gòu)一般流程為:蛋白表達(dá)純化;負(fù)染樣品準(zhǔn)備:約2小時(shí)完成;負(fù)染樣品的數(shù)據(jù)收集:約8小時(shí)完成;冷凍樣品的準(zhǔn)備:約4小時(shí)完成;冷凍樣品的數(shù)據(jù)收集:48-120小時(shí)完成。三維結(jié)構(gòu)重建。冷凍電...
冷凍電鏡技術(shù)原理之電子斷層掃描成像技術(shù):通過(guò)在顯微鏡內(nèi)傾轉(zhuǎn)樣品從而收集樣品多角度的電子顯微圖像并對(duì)這些電子顯微圖像根據(jù)傾轉(zhuǎn)幾何關(guān)系進(jìn)行重構(gòu)的方法稱(chēng)為電子斷層掃描成像技術(shù)。該方法主要應(yīng)用于細(xì)胞及亞細(xì)胞器,以及沒(méi)有固定結(jié)構(gòu)的生物大分子復(fù)合物(分子量范圍為800kD...
胎牛血清制備:離心,將準(zhǔn)備好的瓶放入離心套筒調(diào)好平衡后,對(duì)稱(chēng)放入離心機(jī),按1800轉(zhuǎn)/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫(kù)備用。抽血清,取出4℃冷庫(kù)離心好的瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經(jīng)過(guò)高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接...
胎牛血清:胎牛血清是由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)物等,其組成成份大部分已知,但還有一部分尚不清楚,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。其中不含細(xì)胞、纖維蛋白和凝血因...
胎牛血清應(yīng)該如何保存,可以存放多久?胎牛血清可長(zhǎng)期儲(chǔ)存于-20℃冰箱中。倘若把胎牛血清存放在4℃冰箱,請(qǐng)不要超過(guò)一個(gè)月。如果一次性無(wú)法用完一瓶血清,建議將胎牛血清無(wú)菌條件下分裝并儲(chǔ)存于-20℃,避免反復(fù)凍融。如何正確地解凍胎牛血清?采用逐步解凍法,將胎牛血清從...
胎牛血清制備:離心,將準(zhǔn)備好的瓶放入離心套筒調(diào)好平衡后,對(duì)稱(chēng)放入離心機(jī),按1800轉(zhuǎn)/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫(kù)備用。抽血清,取出4℃冷庫(kù)離心好的瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經(jīng)過(guò)高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接...
活性炭處理胎牛血清的應(yīng)用:活性炭處理胎牛血清主要用于受體研究和雌Hormone相關(guān)的細(xì)胞研究實(shí)驗(yàn)。同時(shí)活性炭處理胎牛血清極大的降低了多種Hormone和生長(zhǎng)因子,減少了影響細(xì)胞生化分析的干擾因子。性炭處理胎牛血清減少了血清中的類(lèi)固醇類(lèi)化合物,3x100nm無(wú)菌...
如何挑選適合細(xì)胞生長(zhǎng)的胎牛血清?原代或是正常細(xì)胞株建議使用BI特級(jí)胎牛血清,對(duì)生長(zhǎng)條件要求高的細(xì)胞和干細(xì)胞可選用特級(jí)胎牛血清,或胚胎干細(xì)胞胎牛血清。由于血清有批間差異,細(xì)胞種類(lèi)不同,我們建議客戶購(gòu)買(mǎi)前可先申請(qǐng)?jiān)囉脴悠罚ㄟ^(guò)篩選得到滿意的血清批號(hào),之后根據(jù)項(xiàng)目需...
如果胎牛血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),應(yīng)該如何去除?胎牛血清中的沉淀物出現(xiàn)有很多種原因,但較普遍的原因是由于胎牛血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白在胎牛血清解凍后,也會(huì)存在于胎牛血清中,這也是造成沉淀物的主要原因之一。但少量絮狀沉淀物,并不影響胎牛血清本...
選購(gòu)FBS應(yīng)考慮哪些標(biāo)準(zhǔn)?產(chǎn)品檢測(cè),每款FBS在生產(chǎn)上市之前,必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)。質(zhì)控環(huán)節(jié)必不可少,以確保上市的血清符合規(guī)定合乎規(guī)格,而血清產(chǎn)品分析證書(shū)(COA)就是FBS質(zhì)控的重要體現(xiàn)。在COA中,常規(guī)的檢測(cè)指標(biāo)包括內(nèi)的毒性、總蛋白、細(xì)菌、病毒等,另外總...
如何區(qū)別真假胎牛血清:主要技術(shù)指標(biāo),1、內(nèi)的毒性,標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml。內(nèi)的毒性是細(xì)菌破碎后細(xì)胞壁的成分,因此內(nèi)的毒性含量的高低可表現(xiàn)出采的血到生產(chǎn)一系列過(guò)程中的無(wú)菌操作情況。目前,國(guó)產(chǎn)血清基本都能達(dá)到這一要求,很多進(jìn)口胎牛血清內(nèi)的毒性含量反而更高,只要求...
胎牛血清的生產(chǎn)工藝:透析胎牛血清,顧名思義,需經(jīng)過(guò)透析。它是在4°C下用特定的透析膜對(duì)血清在0.15MNaCl中透析。由于該透析膜只允許10kDa以下的小分子穿過(guò),在滲透壓的作用下,這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。10kDa以下的小分子有化...
胎牛血清制備:用止血鉗夾住血管,切開(kāi)1厘米左右的切口進(jìn)行插管,插好管后打開(kāi)血管的止血鉗,讓牛血順采的血管流入另一個(gè)潔凈房間內(nèi)的瓶中。采的血瓶采的血前經(jīng)干烤滅菌(180℃2小時(shí))后,按無(wú)菌操作注入10毫升左右經(jīng)高壓滅菌的生理鹽水后加塞封口,于采的血前半小時(shí)放入3...
胎牛血清:在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程,質(zhì)量粗糙的FBS可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)生長(zhǎng)速度緩慢、不貼壁、容易老化等現(xiàn)象,從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)受阻。經(jīng)過(guò)質(zhì)量驗(yàn)證的FBS,則可以十分確定這款FBS對(duì)哪些細(xì)胞具有良好的培養(yǎng)效果,進(jìn)而判斷其能否把自己的細(xì)胞養(yǎng)好。對(duì)于質(zhì)量好的FBS,通常采用血清敏感...
胎牛血清FBS的處理方法?胎牛血清FBS一般需要冷凍保存,在-5到-20°C之間,并且可以在2到8°C的溫度下解凍。將血清等分并冷凍在較小的部分(通常為50ml試管)中通常很有用,以避免多次冷凍和解凍循環(huán)。有時(shí),一些FBS等分試樣在冷凍溫度下仍保留在液體中。這...
胎牛血清-血清的主要成分:血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)物等...
胎牛血清:胎牛血清(FBS),胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無(wú)溶血、無(wú)異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。1、性狀、外觀淺黃色澄清、無(wú)溶血、無(wú)異物稍粘稠液體。2、蛋白質(zhì)含量...
如果胎牛血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),應(yīng)該如何去除?胎牛血清中的沉淀物出現(xiàn)有很多種原因,但較普遍的原因是由于胎牛血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白在胎牛血清解凍后,也會(huì)存在于胎牛血清中,這也是造成沉淀物的主要原因之一。但少量絮狀沉淀物,并不影響胎牛血清本...
如何區(qū)別真假胎牛血清:主要技術(shù)指標(biāo),1、內(nèi)的毒性,標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml。內(nèi)的毒性是細(xì)菌破碎后細(xì)胞壁的成分,因此內(nèi)的毒性含量的高低可表現(xiàn)出采的血到生產(chǎn)一系列過(guò)程中的無(wú)菌操作情況。目前,國(guó)產(chǎn)血清基本都能達(dá)到這一要求,很多進(jìn)口胎牛血清內(nèi)的毒性含量反而更高,只要求...
胎牛血清的功能:胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量較大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的Hormone,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白,能...
胎牛血清:解凍胎牛血清時(shí),請(qǐng)按照規(guī)定的的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若胎牛血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍胎牛血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。請(qǐng)勿將胎牛血清置于37℃太久。若...
胎牛血清:解凍胎牛血清時(shí),請(qǐng)按照規(guī)定的的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若胎牛血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍胎牛血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。請(qǐng)勿將胎牛血清置于37℃太久。若...
血清中絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?1.將冷凍保存的血清取出后,置4℃冰箱靜止過(guò)夜;2.待血清融化后,上下顛倒,輕輕混勻,繼續(xù)4℃2-3小時(shí);3.輕輕吸取上層血清,分裝,余底下50ml左右;4.低速離心5分鐘,去掉沉淀。若解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該怎么處...
胎牛血清的生產(chǎn)工藝:胎牛血清適合脈沖示蹤實(shí)驗(yàn)(同位素標(biāo)記研究細(xì)胞代謝)適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選,避免外源小分子對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生干擾。透析胎牛血清是在胎牛血清的基礎(chǔ)上進(jìn)行加工的。胎牛血清在無(wú)菌條件下要經(jīng)過(guò)0.1微米膜三重過(guò)濾,要進(jìn)行一系列的檢測(cè),包括理化性質(zhì)檢查(如滲透...
胎牛血清的處理方法有:熱滅活,F(xiàn)BS的常見(jiàn)處理方法是熱滅活,其中將FBS在56°C的水浴中加熱30分鐘,偶爾搖晃。目的是滅活FBS中存在的補(bǔ)體系統(tǒng)的任何成分,以及其他潛在的未知細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑。以前熱滅活也是為了去除支原體污染,這不再是一個(gè)問(wèn)題,因?yàn)楝F(xiàn)在所有的血...