CCK-8沒有具體規定反應時間的長短，以具體反映比較好顯色的時間為主。因為不同的細胞反應時間、顯色標準都不一樣，所以一定要設置預實驗。預實驗中，可以先做幾個孔摸索一下接種數量和培養時間。3、懸浮細胞比貼壁細胞難顯色。在加入CCK-8培養后，可每隔一小時觀測一下顏色的變化情況，或者之間用酶標儀檢測更為準確。4、CCK8作用時間越長，OD值就越大，所以對于作用時間也不是越長久越好，要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求檢測孔內不能有氣泡。靈敏度高，數據可靠，重現性好.江蘇cck8英文說明書

CCK-8盒子的選購還記得***次做CCK-8的實驗時研究生二年級的時候，當時用的***個盒子是Sigma的，當時的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich，還不是現在的Millipore-Sigma。那個盒子給了我莫大的鼓勵，因為在那之前做分子克隆一直都不是很順利。這個盒子是我的碩士老板從美國帶回來的，品質有保證，***的結果也是很好的。后面在做CCK-8的實驗時，我們在有選擇的情況下都會買sigma，下圖2是sigma官網的截圖。其實也不貴，只是到貨時間太慢。上海cck8實驗目的無需放射性同位素和有機溶劑，對細胞毒性低.

細胞增殖-毒性檢測1.在96孔板中配制100ml的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時(在37℃，5%CO2的條件下)。2.向培養板加入10ml不同濃度的待測物質。3.將培養板在培養箱孵育一段適當的時間(例如:6,12,24或48小時)。4.向每孔加入10mlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D值的讀數)。5.將培養板在培養箱內孵育1-4小時。6.用酶標儀測定在450nm處的吸光度。7.如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養基，去掉***的影響。當然***影響比較小的情況可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入***后的空白吸收即可。

切記一定要使用無血清的基礎培養基，一是可以排除血清對細胞生長的影響；二是血清的存在會對吸光度的測量產生影響。以上是MTT比色法的介紹，MTT比色法因為涉及到吸出培養基溶解沉淀的操作，所以更適用于貼壁細胞，懸浮細胞比較好選用CCK8檢測細胞增殖，下面給大家介紹一下CCK8操作的注意事項。CCK8實驗操作CCK8的優勢在于對細胞沒有毒性，可以直接加入細胞中長時間孵育，而不用考慮試劑本身對細胞帶來的影響。向各孔中加入10ul的CCK-8檢測溶液。如若檢測的細胞增殖或毒性試驗，需在此之前加入作用***培養適當時間，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8檢測液。CCK-8用途：***篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、**藥敏試驗.

培養板對CCK8測定的影響：不同公司的培養板，以及培養板是否經過處理對讀數都有一定的影響。所以前后實驗要一致。另外在培養箱中，培養板**外一圈的孔容易干燥揮發，從而能導致培養基的體積不一樣，增加誤差。如果有可能，**外一圈的孔只加高壓滅菌的PBS或ddH2O。另外，注意CCK-8不要貼在板壁上。一定要注意是否是***有問題。解決的方案就是可以在測定CCK-8的讀數前，換個細胞液，再測定。這樣會有一定的影響，但是影響的是所有的，所以均一性還算比較好。CCK8細胞增值檢測實驗簡介.浙江cck8軟件

CCK8系列簡稱終于來了.江蘇cck8英文說明書

統一鋪好后，待細胞完全沉淀下來后，在顯微鏡下觀察各實驗組的細胞密度，如果密度不均勻，則固定一組，微調其他組細胞的量再次鋪板（如：發現NC組細胞較多，降低細胞量再次鋪板），放入細胞培養箱中培養。4.從鋪板后第二天開始，每孔加入10-20μlCCK-8溶液，如果每孔的培養基為100μl，則加入10μlCCK-8溶液，如果每孔的培養基為200μl，則加入20μlCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數）。用加了相應量細胞培養液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。江蘇cck8英文說明書

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