CCK-8沒有具體規定反應時間的長短,以具體反映比較好顯色的時間為主。因為不同的細胞反應時間、顯色標準都不一樣,所以一定要設置預實驗。預實驗中,可以先做幾個孔摸索一下接種數量和培養時間。3、懸浮細胞比貼壁細胞難顯色。在加入CCK-8培養后,可每隔一小時觀測一下顏色的變化情況,或者之間用酶標儀檢測更為準確。4、CCK8作用時間越長,OD值就越大,所以對于作用時間也不是越長久越好,要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求檢測孔內不能有氣泡。***篩選:在測定一個***的毒性和安全有效濃度時,經常會用到CCK-8。湖北cck8 ic50
實驗原理:CellCountingKit-8(簡稱CCK-8)試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為:該試劑中含有WST-8【化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物(Formazandye)。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。江蘇cck8詳細CCK8檢測細胞增殖和毒性實驗.
CCK8檢測細胞增殖/毒性的注意事項:1.加入CCK8溶液時不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數;2.要設計空白對照組;3.對于大多數情況,加入CCK8溶液后,孵育2h左右就可以了;4.使用酶標儀之前要提前開啟10min預熱;5.若連續多天檢測,必須保持所有條件一致。相關鏈接:CCK8的特性、保存方法以及與BrdU的區別CCK8空白對照,測定參比波長的設定以及OD值的合適范圍CCK8標準曲線、檢測時間、終止反應以及減少加樣誤差的方法外界因素(金屬/***/細菌/培養基/培養板)對CCK8測定的影響細胞因素(預培養/生長方式/狀態/細胞數/死細胞)對CCK8測定的影響細胞增殖到底用MTT還是CCK8呢?
CCK-8的用途1.細胞增殖測定:細胞增殖實驗在很多領域都會用到,比如**相關、損傷后修復等。2.***篩選:在測定一個***的毒性和安全有效濃度時,經常會用到CCK-8。3.細胞毒性測定:這個可以和各個處理因素對細胞活性和增殖的影響,比如在UV、低氧或者什么化學物品對細胞的影響上。4.**藥敏試驗:這個是用的比較廣的,我見過做**的團隊,買CCK-8都是一整箱,一整箱的買,比如果子老師所在的團隊,哈哈哈。5.微生物對細胞的毒性或增殖的實驗MTT與CCK8區別是什么?
統一鋪好后,待細胞完全沉淀下來后,在顯微鏡下觀察各實驗組的細胞密度,如果密度不均勻,則固定一組,微調其他組細胞的量再次鋪板(如:發現NC組細胞較多,降低細胞量再次鋪板),放入細胞培養箱中培養。4.從鋪板后第二天開始,每孔加入10-20μlCCK-8溶液,如果每孔的培養基為100μl,則加入10μlCCK-8溶液,如果每孔的培養基為200μl,則加入20μlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。用加了相應量細胞培養液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。CCK8原理、優勢和步驟.湖北貼壁細胞 cck8操作細節
加入CCK8那會空白對照組的細胞剛好長滿嗎?湖北cck8 ic50
。一般情況下,**外一圈的孔只加培養基,不作為測定孔用。在培養基中加入CCK8,培養一定的時間,測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時,還應考慮***的吸收,可在加入***的培養基中加入CCK8,培養一定的時間,測定450 nm的吸光度作為空白對照。金屬對CCK-8顯色有影響:當終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會***5%、15%、90%的顯色反應,使靈敏度降級。如果終濃度是10 mM的話,將會*****。懸浮細胞由于染色比較困難,一般需要增加細胞數量和延長培養時間。湖北cck8 ic50
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