代謝組學研究方法:代謝組學的研究方法與蛋白質組學的方法類似,通常有兩種方法。一種方法稱作代謝物指紋分析 (metabolomic fingerprinting),采用液相色譜-質譜聯用(LC-MS)的方法,比較不同血樣中各自的代謝產物以確定其中所有的代謝產物。從本質上來說,代謝指紋分析涉及比較不同個體中代謝產物的質譜峰,然后了解不同化合物的結構,建立一套完備的識別這些不同化合物特征的分析方法。另一種方法是代謝輪廓分析(metabolomic profiling),研究人員假定了一條特定的代謝途徑,并對此進行更深入的研究。代謝組學的研究處于生物信息流的中游。北京靶向代謝組學服務
非靶向代謝組學:非靶向代謝組學可用于檢測生物體內大多數小分子代謝物的動態變化,通過數據處理,多維統計和數學建模來分析生物擾動下的代謝指紋圖譜。尋找兩組間發生明顯變化的差異代謝物,富集差異代謝通路, 獲得整個生物體的代謝輪廓。 技術優勢: 1、代謝組學能放大基因組和蛋白組的微小變化,具有較高的靈敏度、分辨率; 2、具有較寬的動態檢測范圍;3、相比于基因組學和蛋白質組學,檢測費用更為低廉;4、代謝組學比較貼近生物體表型,能更直接、準確地反映生物體的生理病理狀態,適合于生物樣本中潛在標志物的篩選,疾病分期等。武漢植物靶向代謝組學分析方法代謝組學技術可應用于疾病早期診斷。
代謝組學的研究領域有哪些?1、疾病機制研究。2、疾病診斷與防治。3、新藥篩選和開發。4、藥物作用機制的研究。5、藥物毒性評價。6、植物的細胞代謝組學研究。7、微生物代謝組學研究。代謝組能夠檢測到的代謝物含量是多少?不同檢測平臺的靈敏度不一樣,靈敏度比較高,可達到fM級。另外,相同含量的不同物質,由于自身化學性質不同,質譜的離子化效率、信號響應強度會差異很大。物質的檢測靈敏度跟自身的化學性質有關,化學性質的影響主要表現在離子化效率和質譜碎裂行為兩方面。因此,相同含量的不同物質,可能一個能檢測出來,另一個檢測不出來。
代謝組學尿液樣本收集:1)取空腹晨尿、中段尿(臨床)或晨間1 h尿(動物)于50 mL離心管中;2)4 ℃ 下10000 rpm離心10 min取上清,用1.5 mL離心管分裝,保存于-80 ℃。3)動物1 h尿量不夠的情況下,可分多次收集尿液;如需收取24 h尿液,需要使用帶低溫裝置的代謝籠收集,并且及時凍存樣本。4)收集完尿液樣本后,建議使用液氮淬滅15 min后,再分裝多管后于-80 ℃凍存。組織樣本收集:動物組織(包括腦、心、肝、脾、肺、腎、肌肉和皮膚等;軟體動物如血吸蟲):1)取適量組織,用預冷的PBS緩沖液或生理鹽水清洗干凈;2)迅速剝去非必需的脂肪和結締組織,再用PBS緩沖液或生理鹽水沖洗干凈;3)用干凈的無塵吸水紙吸干水分,將組織分成50-100 mg / 管分裝待用;4)管子上做好標記后迅速放入液氮中冷凍處理至少15 min,-80 ℃凍存;干冰運輸。靶向代謝組學著重對于設定好的目標代謝物進行定性、量檢測分析和研究。
代謝組學細胞樣本收集:懸浮細胞:1)連同培養基轉移到1.5 mL的進口離心管中。2)低速離心5 min(低于3000 rpm),使細胞沉淀于離心管的底部(1*107個細胞為宜)。3)倒掉培養基(盡量倒干凈),用預冷的PBS反復沖洗2 ~ 3次,低速離心5 min,棄上清。4)標記離心管,將離心管的尖的一端插入液氮中,淬滅細胞沉淀1 min,-80 ℃凍存,干冰寄送。注意事項:1. 培養基傾倒時盡量倒干凈,可使用濾紙將殘留培養液吸凈;2. 甲醇/水請使用色譜純及以上規格;3. 液氮淬滅細胞時,請小心避免離心管破碎導致樣本受損;4. 建議細胞樣本在進行培養時多準備樣本,以備后續使用。與基因組學和蛋白質組學相比, 代謝組學的研究側重于相關特定組分的共性。武漢植物靶向代謝組學分析方法
為什么選擇代謝組學作為科研技術手段?北京靶向代謝組學服務
代謝組學樣本收集注意事項:1.對于動物組織樣本無法滿足50mg/樣,如海馬組織,大腦組織等,可考慮同組混樣以達到50mg/樣的要求。2.對于含水量高的果實進行取樣很難保持高度均一性(如番茄的果皮、果肉等),建議將整個果實進行液氮研磨后凍干混勻,對混勻后的粉末進行稱重分裝,凍存。3.盡量不要使用錫箔紙以及自封袋包裝樣本,建議將樣本液氮研磨后使用離心管/凍存管進行分裝。4.在使用PBS緩沖液/超純水進行漂洗時,需要盡快處理。5.植物各類組織樣本建議都使用超純水進行漂洗完之后,再研磨分裝凍存,防止因種植過程中施加的一些肥料、農藥等含有表面活性劑或其他雜質,對后續實驗造成影響。北京靶向代謝組學服務