轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序流程:1、樣品RNA準(zhǔn)備。2、測序文庫構(gòu)建。3、DNA成簇(Cluster)擴增。4、高通量測序(Illumina)。5、數(shù)據(jù)分析。轉(zhuǎn)錄組的分析大致有以下幾種情況:1、同一物種在發(fā)育過程中的各時間節(jié)點的基因表達特點及存在的差異;2、不同品系之間存在的差異表達基因;3、不同的外界條件處理,如細(xì)菌、病毒、光照、紫外、干旱、高溫、高鹽脅迫,對基因表達的影響;4、同一個體,不同組織之間的基因表達差異。簡而言之,轉(zhuǎn)錄組學(xué)是從RNA水平研究基因表達的情況。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序樣品純度要求,OD值應(yīng)在1.8至2.2之間。廣州mRNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜鑒定
宏轉(zhuǎn)錄學(xué)組的概念:宏轉(zhuǎn)錄組是特定時期、環(huán)境樣本、組織樣本中所有的微生物的RNA(轉(zhuǎn)錄本)的匯合。通過對這些轉(zhuǎn)錄本進行大規(guī)模高通量測序,可以直接獲得環(huán)境中可培養(yǎng)和不可培養(yǎng)的微生物轉(zhuǎn)錄組信息。這種技術(shù)不只具有宏基因組技術(shù)的全部優(yōu)點,可以檢測環(huán)境中的活性微生物、活性轉(zhuǎn)錄本以及活性功能進行研究,還可以比較不同環(huán)境下的差異表達基因和差異功能途徑,揭示微生物在不同環(huán)境壓力下的適應(yīng)機制,探索環(huán)境與微生物之間的互作機理。上海靶向轉(zhuǎn)錄組學(xué)服務(wù)轉(zhuǎn)錄組學(xué)無需了解物種基因信息,能夠直接對任何物種進行轉(zhuǎn)錄組分析。
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)基本概念:普通轉(zhuǎn)錄組的思路也可以應(yīng)用到單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組。普通轉(zhuǎn)錄組相當(dāng)于把一群細(xì)胞混合到一起去提取RNA,獲得的是每個細(xì)胞中RNA表達量的平均值。單細(xì)胞是把每個細(xì)胞單獨分出來去提取RNA,然后建庫測序,獲得是是單個細(xì)胞的表達值。在每個細(xì)胞里面基因的表達具有隨機性,且存在異質(zhì)性。而且這些細(xì)胞群中會存在不同類型的細(xì)胞,尤其是當(dāng)我們對整個組織進行測序時,它們本身就是由不同類型的細(xì)胞組成的,而我們用普通轉(zhuǎn)錄組來測序,相當(dāng)于掩蓋住了這些不同的細(xì)胞類型的差異,展示的是整個組織的平均的狀態(tài),所以說單細(xì)胞從這個來看跟普通轉(zhuǎn)錄組就不同在是用一個細(xì)胞測,不是用一堆細(xì)胞測。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域:農(nóng)林領(lǐng)域:生長發(fā)育機制,抗逆脅迫機制,育種,物種保護研究等;畜牧業(yè):生長發(fā)育機制,致病機理研究,肉類及乳制品品質(zhì)研究等;海洋水產(chǎn):生長發(fā)育機制,漁業(yè)資源,漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品安全等;微生物:致病機理,耐藥機制,病原體-宿主相互作用研究等;生物醫(yī)藥:生物標(biāo)志物,疾病機理機制,疾病分型,藥物開發(fā),個性化醫(yī)治等;環(huán)境科學(xué):發(fā)酵過程優(yōu)化,生物燃料生產(chǎn),環(huán)境危害風(fēng)險評估研究等;食品科學(xué):食品儲藏及加工條件優(yōu)化,食品組分及品質(zhì)鑒定,功能性食品開發(fā),食品安全監(jiān)檢測等。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可以直接測定每個轉(zhuǎn)錄本單核苷酸分辨率的準(zhǔn)確度。
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù):10×genomics技術(shù):首先在凝膠微珠上種上特定的DNA的片段,DNA的片段由三部分組成:Barcode、UMI、PolyT組成。Barcode是16個堿基的長度。一共有400萬種Barcode,一個微珠是對應(yīng)于一種Barcode,通過這400萬種Barcode,可以把凝膠微珠給區(qū)分開(通過barcode可以把cell分開)。UMI是一段隨機序列,也就是說每一個DNA分子,都有自己的UMI序列(一個微珠上有很多種UMI,通過UMI可以把RNA分子分開,并可以標(biāo)記RNA分子的數(shù)量)。10個堿基長的UMI,有100萬種序列的變化(4^10=1,048,576),UMI的作用是為了區(qū)分哪些reads是來自于一個原始cDNA分子區(qū)分基因片段重復(fù)還是duplication及區(qū)分是真實的SNP位點還是PCR產(chǎn)生的突變。通過10×genomics儀器將單個細(xì)胞與單個凝膠微珠通過油相混在一起,形成油包水的小微滴。轉(zhuǎn)錄學(xué)組測序可對任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動進行檢測。四川單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)費用
轉(zhuǎn)錄組學(xué)是一門在整體水平上研究細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科。廣州mRNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜鑒定
全長轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序:由于在轉(zhuǎn)錄組研究中通常所使用的第二代測序技術(shù)具有測序讀長的限制,因此在進行測序之前,需要先將樣本的mRNA打碎為小片段,之后再通過與參考基因組比對或拼接的方式識別轉(zhuǎn)錄本,這就會造成一定的錯誤比例,同時在也很難區(qū)分單堿基水平的差異。全長轉(zhuǎn)錄組測序的優(yōu)勢:1、全方面鑒定可變剪切;2、發(fā)現(xiàn)更多新基因;3、有效改善基因組注釋;4、鑒定更多的LncRNA;5、準(zhǔn)確定位融合基因。研究思路:由于全長轉(zhuǎn)錄組測序是基于第三代測序技術(shù),因而其成本依然較高,如果全部研究項目均基于全長轉(zhuǎn)錄組,通常來說很難承擔(dān),因此,全長轉(zhuǎn)錄組測序一般與普通轉(zhuǎn)錄組測序相結(jié)合。廣州mRNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜鑒定
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