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湖北動物靶向代謝組學定量分析

來源: 發布時間:2022-01-26

代謝組學介紹:通過液質聯用(LC-MS)方法檢測生物體受外界刺激前后體內大多數小分子代謝物的動態變化,重點尋找在實驗組和對照組中有明顯變化的代謝物,進而研究這些代謝物與生理病理變化的相關關系,其研究對象大多是分子量1500Da以內的小分子物質。技術優勢:較高的靈敏度、分辨率;較寬的動態范圍;適合對標本中未知代謝物的探索研究;適合于生物樣本中復雜代謝產物的檢測和潛在標志物的鑒定。代謝組學應用方向: 土壤代謝組學。研究土壤中有機質及土壤微生物代謝含量變化及相互作用,了解土壤微生物多樣性及其碳代謝能力,為探索調節、控制和改善土壤環境質量提供重要的參考。代謝組學關注的對象是分子量在1000以下的小分子化合物。湖北動物靶向代謝組學定量分析

靶向代謝組學分析成功的關鍵因素是準確度、高通量和可靠性。靶向代謝組學鑒定一般采用 GC/MS 系統的選擇性離子監測 (SIM),或在三重串聯四極桿 LC/MS 系統上用多反應離子監測 (MRM) 進行靶向 MS/MS。SIM 比全掃描圖譜采集具有更高的靈敏度,在單四極桿質譜中,這種靈敏度增強的原因是延長了所選擇離子的采集時間。因為監測的是一個很小的質量窗口,所以質量色譜圖只表示對極為特定質量的檢測。在大多數情況下,靈敏度可以提高 10 倍。MRM 是進行質譜定量的選擇方法,與 SIM 相比更為靈敏、更加特異。可以產生獨特的碎片離子,可對非常復雜基質中的目標化合物進行監測和定量。河南常規靶向代謝組學服務代謝組學作為系統生物學的一個重要的分支,與其他組學相比有著其特有的優勢。

代謝組學概念:基因與蛋白質的表達緊密相連,而代謝物則更多地反映了細胞所處的環境,這又與細胞的營養狀態,藥物和環境污染物的作用,以及其它外界因素的影響密切相關。因此有人認為,“基因組學和蛋白質組學告訴你什么可能會發生,而代謝組學則告訴你什么確實發生了。”代謝組學的概念來源于代謝組,代謝組是指某一生物或細胞在一特定生理時期內所有的低分子量代謝產物,代謝組學則是對某一生物或細胞在一特定生理時期內所有低分子量代謝產物同時進行定性和定量分析的一門新學科。它是以組群指標分析為基礎,以高通量檢測和數據處理為手段,以信息建模與系統整合為目標的系統生物學的一個分支。

什么是非靶向代謝組學、靶向代謝組學?(1) 非靶向代謝組學(Untargeted metabolomics)即非目標代謝組學或發現代謝組學,無偏向性地對所有小分子代謝物(一般相對分子量小于1000)同時進行檢測分析的代謝組學。(2) 靶向代謝組學(Trgeted metabolomics)則為目標性代謝組學,著重對于設定好的目標代謝物進行定性、量檢測分析和研究。相比于其他組學,代謝組學有哪些特殊的優勢?系統生物學有基因組學、轉錄組學、蛋白組學和代謝組學。代謝組學作為系統生物學的一個重要的分支,與其他組學相比有著其特有的優勢,主要體現在以下幾點:(1) 基因與蛋白質表達的微小變化會在相應代謝物水平上得到放大,更容易被檢測。(2) 代謝物的種類要遠小于基因和蛋白的數目。(3) 可與生物表型變化建立直接相關性。代謝組學的研究方法與蛋白質組學的方法類似。

代謝組學樣品收集方法及所需樣本量是什么?(1) 血清樣品: 避免反復凍融。血液收集在離心管中靜置30分鐘進行凝血。8000rpm離心10分鐘,取上清分裝到凍存管中,放置液氮中或-80度凍存;單個樣本要求體積為50μL。(2) 尿液樣品:臨床樣本請全部取清晨第1次尿液。尿液直接分裝到離心管中,8000rpm離心10分鐘,取上清分裝到凍存管中,放置液氮中或-80度凍存,-80度凍存;單個樣本要求體積為100μL。(3) 其他樣本收集辦法請咨詢譜領工作人員。代謝組學技術得到了迅速發展。廣東非靶向代謝組學分析

代謝組學先進分析檢測技術結合模式識別和**系統等計算分析方法是代謝組學研究的基本方法。湖北動物靶向代謝組學定量分析

代謝組學尿液樣本收集:1)取空腹晨尿、中段尿(臨床)或晨間1 h尿(動物)于50 mL離心管中;2)4 ℃ 下10000 rpm離心10 min取上清,用1.5 mL離心管分裝,保存于-80 ℃。3)動物1 h尿量不夠的情況下,可分多次收集尿液;如需收取24 h尿液,需要使用帶低溫裝置的代謝籠收集,并且及時凍存樣本。4)收集完尿液樣本后,建議使用液氮淬滅15 min后,再分裝多管后于-80 ℃凍存。組織樣本收集:動物組織(包括腦、心、肝、脾、肺、腎、肌肉和皮膚等;軟體動物如血吸蟲):1)取適量組織,用預冷的PBS緩沖液或生理鹽水清洗干凈;2)迅速剝去非必需的脂肪和結締組織,再用PBS緩沖液或生理鹽水沖洗干凈;3)用干凈的無塵吸水紙吸干水分,將組織分成50-100 mg / 管分裝待用;4)管子上做好標記后迅速放入液氮中冷凍處理至少15 min,-80 ℃凍存;干冰運輸。湖北動物靶向代謝組學定量分析

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