通過添加FACED模塊,可以將基于標準振鏡的現有2PM輕松轉換為千赫茲成像系統。FACED雙光子熒光顯微鏡遵循光柵掃描,需要很少的計算處理,在稀疏或密集的標記樣本中均可以使用,并且不受串擾的影響,而且對整個圖像平面采樣后可以進行運動校正。實驗中沒有觀察到光損傷的跡象,此外,子脈沖延遲到達相同的樣品位置,能為熒光團提供充足的時間使其從易于破壞的暗態返回到基態,可以明顯減少光漂白。使用現有的傳感器,FACED雙光子熒光顯微鏡可以提供足夠的速度和靈敏度來檢測神經元過程中的鈣瞬變和谷氨酸瞬變,以及來自細胞體的尖峰和亞閾值電壓。該組使用基于FACED的2PM顯微鏡,在小鼠大腦中實現了千赫茲速率的神經活動成像。在物鏡平均激光功率為10-85mW下,他們測量了清醒小鼠中V1神經元的自發性和感覺誘發性的超閾值和亞閾值電位活動。雙光子共聚焦顯微鏡比單光子共聚焦顯微鏡具有更亮的橫向分辨率和縱向分辨率。靈長類多光子顯微鏡實驗
多光子激光掃描顯微鏡的產業發展,世界多光子激光掃描顯微鏡產業主要分布在德國和日本,德國以徠卡顯微系統和蔡司為基礎,日本以尼康和奧林巴斯為基礎。2020年以來,這些企業占據了全球多光子激光掃描顯微鏡市場的64.44%,它們的發展策略影響著多光子激光掃描顯微鏡市場的走向。目前,世界市場對多光子激光掃描顯微鏡的需求正在增長,中國市場的需求增長更快。未來五年多光子激光掃描顯微鏡市場的發展在中國將仍有巨大的發展潛力。熒光多光子顯微鏡多光子共聚焦掃描顯微鏡比雙光子共聚焦掃描顯微鏡具有更高的空間分辨率。
隨著生物分子光學標記技術的不斷進步,光學技術在揭示生命活動基本規律的研究中正發揮越來越重要的作用,也為醫學診療提供了更多、更有效的手段。生物醫學光學是近年來受到國際光學界和生物醫學界關注的研究熱點,在生物活檢、光動力、細胞結構與功能檢測、基因表達規律的在體研究等問題上取得了一系列研究成果,目前正在從宏觀到微觀上對大腦活動與功能進行多層面的研究。細胞重大生命活動(包括細胞增殖、分化、凋亡及信號轉導)的發生和調節是通過生物大分子間(如蛋白質-蛋白質、蛋白質-核酸等)相互作用來實現的。蛋白質作為基因調控的產物,與細胞和機體生理過程代謝直接相關,深入研究基因表達及蛋白質-蛋白質相互作用不僅能揭示生命活動的基本規律,同時也能深入了解疾病發生的分子機理,進而為尋找更有效的藥物分子、提高藥物篩選和藥物設計的效率提供新的方法和思路。
使用基因編碼的熒光探針可以在突觸和細胞分辨率下監測體內神經元信號,這是揭示動物神經活動復雜機制的關鍵。使用雙光子顯微鏡(2PM)可以以亞細胞分辨率對鈣離子傳感器和谷氨酸傳感器成像,從而測量不透明大腦深處的活動;成像膜電壓變化能直接反映神經元活動,但神經元活動的速度對于常規的2PM來說太快。目前電壓成像主要通過寬場顯微鏡實現,但它的空間分辨率較差并且于淺層深度。因此要在不透明的大腦中以高空間分辨率對膜電壓變化進行成像,需要明顯提高2PM的成像速率。多光子顯微鏡作為一種研究微觀結構和功能的技術,在眾多領域得到了普遍的應用。
雙光子熒光顯微成像主要有以下優點∶a.光損傷小∶雙光子熒光顯微鏡使用可見光或近紅外光作為激發光,對細胞和組織的光損傷很小,適合于長時間的研究;b.穿透能力強∶相對于紫外光,可見光或近紅外光具有很強的穿透性,可以對生物樣品進行深層次的研究;c.高分辨率∶由于雙光子吸收截面很小P,只有在焦平面很小的區域內可以激發出熒光,雙光子吸收局限于焦點處的體積約為λ范圍內;d.漂白區域很小,焦點以外不發生漂白現象。e.熒光收集率高。與共聚焦成像相比,雙光子成像不需要光學濾波器,提高了熒光收集率。收集效率提高直接導致圖像對比度提高。f.對探測光路的要求低。由于激發光與發射熒光的波長差值加大以及自發的三維濾波效果,多光子顯微鏡對光路收集系統的要求比單光子共焦顯微鏡低得多,光學系統相對簡單。g.適合多標記復合測量。許多染料熒光探針的多光子激發光譜要比單光子激發譜寬闊,這樣,可以利用單一波長的激發光同時激發多種染料,從而得到同一生命現象中的不同信息,便于相互對照、補充。光子顯微成像技術不是什么新技術,早在20多年前就有了,目前已經在生命科學和材料科學中廣泛應用。布魯克多光子顯微鏡實驗操作
世界多光子激光掃描顯微鏡產業主要布局在德國和日本,德國是徠卡顯微系統和蔡司。靈長類多光子顯微鏡實驗
現代分子生物學技術的迅速發展和科技的進步,特別是隨著后基因組時代的到來,人們已經能夠根據需要建立各種細胞模型,為在體研究基因表達規律、分子間的相互作用、細胞的增殖、細胞信號轉導、誘導分化、細胞凋亡以及新的血管生成等提供了良好的生物學條件。然而,盡管人們利用現有的分子生物學方法,已經對基因表達和蛋白質之間的相互作用進行了深入、細致的研究,但仍然不能實現對蛋白質和基因活動的實時、動態監測。在細胞的生理過程中,基因、尤其是蛋白質的表達、修飾和相萬作用往往發生可逆的、動態的變化。目前的分子生物學方法還不能捕獲到蛋白質和基因的這些變化,但獲取這些信息對與研究基因的表達和蛋白質之間的相互作用又至關重要。因此,發展能用于、動態、實時、連續監測蛋白質和基因活動的方法非常必要。靈長類多光子顯微鏡實驗