Guide-seq原理圖，Discover-seq細胞內的脫靶切割一般無法直接捕獲，除了Guide-seq這種連接dsODN來間接記錄脫靶位點的方法外，研究者們還想出一種蛋白介導的方法Discover-seq。由于DNA雙鏈斷裂后細胞會啟動DNA修復機制，大量蛋白參與到斷裂處的修復，所以研究者就對相關蛋白進行篩選，找到其中MRE11結合DNA的位點與DNA雙鏈斷裂的相關性比較好。DISCOVER-seq便是通過MRE11的CHIP-seq（染色質免疫共沉淀）來反映CRISPR的脫靶位點。。。。脫靶檢測在揭示CRISPR/Cas9系統的脫靶機制以及進一步提高系統靶向性的研究中具有重要作用。江蘇基因療法脫靶檢測評估標準

    基因編輯脫靶檢測方法：ChIP-seq：利用缺乏DNA切割活性的dCas9結合DNA的特性，進行全基因組范圍的結合情況檢測，以評估潛在的脫靶位點。IDLVcapture：基于非同源末端連接（NHEJ）的DNA修復過程，通過轉染篩選基因的IDLV進行篩選，以確認脫靶位點。GUIDE-seq：利用雙鏈DNA斷裂（DSB）位點的非同源末端連接過程中可以連入雙鏈DNA的特性，通過引入短雙鏈寡核苷酸來標記CRISPR/Cas9切割的DSB，進而確定脫靶突變的位置。LAM-HTGTS：基于CRISPR/Cas9等造成的DSB可能導致染色質DNA的易位連接，通過檢查這些易位連接位點來識別潛在的脫靶位點。BLESS/BLISS/End-seq/DSBCapture等：這些方法通過直接在DSB位點連入接頭，捕獲DSB位點，結合高通量測序技術進行脫靶位點檢測。DISCOVER-seq：利用DNA修復因子（如MRE11）結合染色質免疫共沉淀和高通量測序的方法，捕獲CRISPR/Cas9造成的DSB位點，進而鑒定潛在的脫靶位點。 上海高精度脫靶檢測報告檢測脫靶效應比較好的方法:CIRCLE-seq。

    脫靶檢測是指通過檢測基因編輯工具（如CRISPR/Cas9）是否在非目標位點發生切割或改變DNA序列，以評估其安全性和有效性。這種檢測方法可以幫助研究人員避免潛在的副作用和風險，并確保基因編輯工具在正確的位置發揮作用。脫靶檢測可以通過多種方法進行，包括高通量測序、PCR擴增、生物信息學分析和表型分析等。其中，高通量測序是一種常用的方法，它可以通過比較編輯前后的DNA序列來確定是否存在非目標位點的切割或改變。PCR擴增則可以通過檢測編輯后的DNA序列來確定是否存在非目標位點的切割。生物信息學分析可以通過比對編輯前后的DNA序列和已知的基因組信息來確定是否存在非目標位點的切割。表型分析則可以通過觀察編輯后的細胞或生物體的表型變化來確定是否存在非目標位點的切割。脫靶檢測對于基因編輯技術的安全性和有效性至關重要。如果基因編輯工具在非目標位點發生切割或改變DNA序列，可能會導致不可預測的后果，如基因突變。因此，脫靶檢測可以幫助研究人員評估基因編輯技術的風險，并采取相應的措施來降低風險。

隨著基因編輯技術的不斷發展和完善，脫靶檢測技術也將不斷進步和創新。未來的脫靶檢測技術將更加靈敏、特異和高效，能夠覆蓋更廣的基因組和基因組編輯工具。此外，隨著人工智能和機器學習技術的發展，基于大數據和算法的脫靶預測和驗證方法也將成為可能。在生物醫學研究中，脫靶檢測技術的改進和創新將有助于提高基因編輯技術的安全性和有效性，推動其在疾病干預和基因療法中的應用。同時，脫靶檢測技術的發展也將促進對基因功能和基因組復雜性的深入理解，為生物醫學研究提供新的思路和方法。根據選擇的sgRNA，通過生物信息學方法，對sgRNA進行脫靶分析。

 體外檢測技術體外檢測方法通過將編輯工具與基因組DNA在體外孵育來預測潛在脫靶位點。3.1.1 CIRCLE-seqCIRCLE-seq是一種基于體外環化基因組DNA的檢測方法。該方法將基因組DNA片段化后環化，使用Cas9蛋白和gRNA進行體外切割，通過高通量測序識別切割位點。該方法具有較高靈敏度，可檢測低頻脫靶事件。3.1.2 Digenome-seqDigenome-seq直接在體外用Cas9處理基因組DNA，通過全基因組測序尋找雙鏈斷裂位點。該方法不需要復雜的DNA處理步驟，操作相對簡單。3.2 體內檢測技術體內檢測方法直接在細胞或生物體中進行脫靶分析，更接近實際應用場景。3.2.1 GUIDE-seqGUIDE-seq通過在細胞中導入雙鏈寡核苷酸標簽，標記DNA雙鏈斷裂位點。這些標簽會整合到斷裂位點，通過測序可識別編輯工具產生的所有切割位點，包括目標位點和脫靶位點。3.2.2 DISCOVER-seqDISCOVER-seq利用DNA損傷修復過程中產生的特定標記來識別編輯位點。該方法不需要外源標簽，通過檢測內源性的修復信號實現脫靶檢測。3.3 生物信息學預測工具多種生物信息學工具被開發用于預測潛在的脫靶位點，如Cas-OFFinder、CRISPResso等。這些工具基于序列相似性算法，可以快速預測gRNA可能結合的基因組區域。脫靶切割位點已在基因編輯技術,CRISPR / Cas9,ZFNs和TALEN。寧波種子基因脫靶檢測報告

脫靶檢測實驗室，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。江蘇基因療法脫靶檢測評估標準

基因編輯技術，特別是CRISPR-Cas系統和MicroRNA技術，在生物醫學研究中展現出了巨大的潛力。然而，這些技術也面臨一個共同的挑戰——脫靶效應（Off-target Effect）。脫靶效應指的是基因編輯工具在靶向特定基因時，意外地對其他非目標基因進行編輯或調控，可能導致意外的生物學后果。因此，脫靶檢測成為確保基因編輯技術安全性和有效性的關鍵步驟。本文將探討脫靶效應的原理、影響以及現有的脫靶檢測技術。脫靶效應的產生主要源于基因編輯工具與目標DNA序列之間的非特異性結合。以CRISPR-Cas系統為例，其工作原理是通過導向RNA（gRNA）識別并結合特定的DNA序列，然后Cas酶在目標位點進行切割。江蘇基因療法脫靶檢測評估標準