當使用標準96孔板時，貼壁細胞的**小接種量至少為1000 個/孔(100μl培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2500 個/孔(100μl培養基)。酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

注意事項CCK8可以檢測大腸桿菌，但不能檢測酵母細胞。在細胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細菌污染，以免影響結果。CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個月，在-20℃下避光可以保存1年。當在培養箱內培養時，培養板**外一圈的孔**容易干燥揮發，由于體積不準確而增加誤差。一般情況下，**外一圈的孔只加培養基，不作為測定孔用。在培養基中加入CCK8，培養一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。 主要是重復性優于MTT；北京cck8價格

在做一些***毒性試驗時，比如做鐵死亡途徑時，我們加入一個***叫C1，這個時候就需要提前換液，其實我們試過，還是會有一些影響。所以這時我們用中性紅檢測。我們實驗室，通常會用20%的硫酸銅溶液放到細胞孵箱下層，預防******。理應說，硫酸銅分子在水溶液中是硫酸根離子和銅離子，是不會揮發的。但是每次只要是新換的硫酸銅溶液再做CCK-8，結果總是不好，我也不知道是什么原因。之前在我們實驗室有發生過這樣的事情，這種有深有淺的才是該有的結果。我想說的是在有能力選擇范圍內，盡量選擇好一點的試劑，免得浪費時間。江蘇cck8 dojindo 說明書MTT與CCK8區別是什么?

、***濃度的確定需要做一個時間梯度，鋪板和上述相同，只需把各個實驗組改成各個作用時間就可以了。至于說***濃度的確定，網上有很多確認方法，個人建議以IC50值作為***濃度即可。計算方法，某園子里都有，就不在這里介紹了。

MTT作用之后，一定要小心吸走培養液，以免將孔內的紫色結晶吸走。有條件的實驗室，這一步可以采用離心機將沉淀充分離心到孔底，防止被吸出。如果沒有這種類型的離心機，可以在測量吸光度的時候，將酶聯免疫的機器震蕩時間調制5分鐘，**起碼可以保證沉淀充分溶解。

酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾；◆細胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復用酶標儀讀數從而找到比較好測定時間。實驗二：細胞增殖-毒性檢測1、在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時（37℃，5%CO2）。2、向培養板加入10μL不同濃度的待測物質。3、將培養板在培養箱孵育一段適當的時間（例如：6、12、24或48小時）。4、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數）。5、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進行細胞計數的一個盒子。

摸條件包括1、種板數；2、種板后細胞的貼壁生長時間；3、加藥后的孵育時間；4、cck8試劑加入量；5、cck8試劑加入后細胞孵育時間。看起來很多，其實這就是一個實驗。而且都是種的空白板，也就是不加藥物，只加細胞和CCK8。我沒有做過MTT實驗，但其實原理及目的都是一樣的（反應機理不一樣）。都說CCK8簡單點而且數據更穩定，所以就用了這個試劑盒。

當然仁者見仁智者見智，我寫的只是個人實驗心得，但供參考。歡迎大家拍磚共同進步。實驗是簡單的，道路是曲折的，時間就是用來浪費的，科研就是自娛自樂使勁折騰。

培養板周圍一圈孔培養液容易揮發，為減少誤差，建議培養板周圍的四邊每孔只加培養基。江蘇cck8標準曲線

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