總RNA提取試劑盒

Trizol是廣譜型總RNA提取試劑。實驗操作快速方便，顏色鮮明，便于分層。本試劑適用范圍較大，可以從動物單位、 植物材料、 各種微生物及培養細胞等樣品中提取總RNA。 該方法對少量的單位(50-100mg)和細胞(5×106)以及大量的單位(≥1g)和細胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在Trizol中被充分裂解的同時能夠比較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后，溶液會分成三層：上層無色水相、中間層和下層紅色有機相，RNA 分布在上清層中。收集上清層后，經異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好，無蛋白和DNA污染，可用于各種分子生物學常規實驗，如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、體外翻譯等。

Trizol 試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如，從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色，可見許多介于7kb和15 kb之間不連續的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分)，兩條優勢核糖體~5 kb(28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之間 (tRNA, 5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。(注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳，28S的位置大約在2kb，18S大約在1kb的位置，不同濃度的凝膠位置變化較大。)

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避免產生沉淀物1、解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃，實驗顯示非常容易產生沉淀物。2、解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生3、請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質量。4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。5、若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現，該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養基內一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞過濾膜。上海血清進口有一些細胞，如內皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。

保存方法血清應保存在-5℃至-20℃。然而，若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議將無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。如何解凍血清才不會使產品質量受損？將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過程中必須規則地搖晃均勻。注意事項（1）一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發現血清有懸浮物,則可將血清加入培養液內一起過濾,切勿直接過濾血清.（2）血清中的沉淀物絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理.顯微鏡下"小黑點":經過熱處理過的血清,沉淀物的形成會較好增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清.（3）切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質量.

血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要由水和各種化學成分組成,這些化學成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、***、無機物等，這些物質對促進細胞生長或***生長活性是達到生理平衡的。對血清的成分和作用的研究雖有很大進展，但仍存在一些問題。能夠維持培養基的pH 值，起酸堿緩沖液作用；

血清的鑒別方法

血清

血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應被，血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經離心取得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點是與血漿比較大的區別。而在凝血反應中，血小板釋放出許多物質，各凝血因子也都發生了變化。這些成分都留在血清中并繼續發生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區別之處。但大量未參加凝血反應的物質則與血漿基本相同。為避免抗凝劑的干擾，血液中許多化學成分的分析，都以血清為樣品。血漿血漿是血液的液體成分，血細胞懸濁于其中。人體含有2750-3300毫升血漿，約占血液總體積的55%。血漿的絕大部分是水（體積的90%），其中溶解的物質主要是血漿蛋白，還包括葡萄糖、無機鹽離子以及二氧化碳。血漿的主要功能是運載血細胞，同時也是運輸分泌產物的主要媒介。

將新鮮血液離心，使血細胞沉降，上層淡黃色清液即是血漿。血漿與血清的區別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。 方法采用血清學和染色體DNA脈沖場凝膠電泳圖譜分析。浙江進口胎牛血清進口

牛血清中含有豐富的細胞生長必須的營養成份，具有極為重要的功能。杭州豬 血清培養細胞

無血清細胞凍存液的操作規范：  1、培養細胞至對數生長晚期，顯微鏡觀察其外觀、形態、有無污染等。選擇狀態良好的細胞進行凍存操作(注：貼壁生長細胞，用胰蛋白酶消化并用完全培養基終止消化，進行細胞計數;懸浮生長細胞，進行細胞計數)。  2、500～1000g離心5min，棄上清。  3、加入適量的細胞凍存液，重懸細胞，使細胞濃度達到1～10×106/ml，置于凍存管中密閉。  4、采取逐級降溫保存：4℃放置20min，-20℃放置30min，-70℃過夜，***置于液氮罐中長期存儲。  注意：  務必超凈工作臺內無菌操作，避免污染。  雜交瘤細胞凍存時應定期復蘇，以檢查細胞的活性和分泌抗體的穩定性。杭州豬 血清培養細胞

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