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廣東Label free非標記定量蛋白質組學服務

來源: 發布時間:2022-01-24

蛋白質組學主要以全蛋白組(組織、細胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,通過對蛋白組進行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學功能、作用機制、疾病診斷的標志物以及預測蛋白的上、下游變化關系。蛋白質組學可以克服核酸水平預測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術:非靶向蛋白組學:蛋白質定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學。在未來的發展中,蛋白質組學的研究領域將更加普遍。廣東Label free非標記定量蛋白質組學服務

蛋白質組學技術:飛行時間質譜:MALDI的基本原理是將分析物分散在基質分子(尼古丁酸及其同系物)中并形成晶體,當用激光(337nm的氮激光)照射晶體時,基質分子吸收激光能量,樣品解吸附,基質-樣品之間發生電荷轉移使樣品分子電離。它從固相標本中產生離子,并在飛行管中測定其分子量,MALDI-TOF-MS一般用于肽質量指紋圖譜,非常快速(每次分析只需3~5min),靈敏(達到fmol水平),可以精確測量肽段質量,但是如果在分析前不修飾肽段,MALDI-TOF-MS不能給出肽片段的序列。貴陽修飾蛋白組學一般流程定量蛋白質組學技術主要分為標記(label)和非標記(label free)定量策略。

Labelfree非標記定量蛋白質組學技術特點:(1)不需要標記處理,操作簡單,成本低、實驗周期短;(2)每個樣品單獨處理、上機;(3)可以做任意樣本的總蛋白質差異定量,樣品類型不受限制;(4)對單個樣品的蛋白總量要求相對較低,對于組織本身蛋白量不高,可以選擇Label-Free,適用于一些難收集樣品;(5)定性沒有問題,但是定量的準確性較標記定量稍差,會受到質譜穩定性等因素的影響;(6)適合于大樣本量的定量比較(大于24個樣本)。蛋白質組學在醫學的研究應用:蛋白質組學(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質組成、定位、變化及其相互作用規律的科學。

蛋白質組學技術:電噴霧質譜:ESI-MS是利用高電場使質譜進樣端的毛細管柱流出的液滴帶電,在N2氣流的作用下,液滴溶劑蒸發,表面積縮小,表面電荷密度不斷增加,直至產生的庫侖力與液滴表面張力達到雷利極限,液滴爆裂為帶電的子液滴,這一過程不斷重復使液滴非常細小呈噴霧狀,這時液滴表面的電場非常強大,使分析物離子化并以帶單電荷或多電荷的離子形式進入質量分析器。ESI-MS從液相中產生離子,一般說來,肽段的混合物經過液相色譜分離后,經過偶聯的與在線連接的離子阱質譜分析,給出肽片段的精確的氨基酸序列,但是分析時間一般較長。目前,許多實驗室兩種質譜方法連用,獲得有意義的蛋白質的肽段序列,設計探針或引物來獲得有意義的基因。隨著蛋白質組研究的深入,又有多種新型質譜儀出現,主要是在上述質譜儀的基礎上進行改進與重新組合。對人類而言,蛋白質組學的研究終究要服務于人類的健康。

定量蛋白質組學技術:定量蛋白質組學技術主要分為標記(label)和非標記(labelfree)定量策略,標記策略又分為體內標記和體外標記兩種。細胞內蛋白質組豐度的動態變化對各種生命過程有重要影響。例如在許多疾病的發生和發展進程中,常常伴隨著某些蛋白質的表達異常。定量蛋白質組學就是把一個基因組表達的全部蛋白質或一個復雜的混合體系中所有的蛋白質進行精確的定量和鑒定。非標記(labelfree)的定量蛋白組學技術,Labelfree定量蛋白組學技術是通過液質聯用技術對蛋白質酶解肽段進行質譜分析,無需使用昂貴的穩定同位素標簽做內部標準,只需分析大規模鑒定蛋白質時所產生的質譜數據,比較不同樣品中相應肽段的信號強度,從而對肽段對應的蛋白質進行相對定量。蛋白質組學技術并帶領生物技術取得關鍵性的突破。河南定量蛋白組學分析方法

在當前的生物醫學研究和臨床診斷中,蛋白質組學相關技術有非常多的應用。廣東Label free非標記定量蛋白質組學服務

蛋白質組學技術:等電聚焦:等電聚焦(isoelectricfocusing,IEF)是一種利用有pH梯度的介質分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。等電聚焦凝膠電泳依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離,等電聚焦中,蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸,在電場中形成正極為酸性,負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷,因此可以在電場中移動;當蛋白質遷移至其等電點位置時,其靜電荷數為零,在電場中不再移動,據此將蛋白質分離。廣東Label free非標記定量蛋白質組學服務

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