轉錄組學測序結果的影響因素？RNA的降解嚴重影響測序的質量，RNA降解后，加入poly-A后無法捕獲純化mRNA，因此，隨機引物反轉錄無法得到全部的cDNA，導致測序結果出現明顯的3‘-和5’-偏向。文庫中的poly-A多聚物的存在會對測序信號產生干擾，影響測序結果的準確性；同時由于轉錄組中轉錄本的豐度不一致，實驗前需要對樣本進行均一化處理，否則高豐度的表達基因會掩蓋低豐度表達基因，導致尋找新基因失敗或者是獲得大量無意義的重復序列。轉錄組學無需了解物種基因信息，能夠直接對任何物種進行轉錄組分析。浙江宏轉錄學組研究內容

全長轉錄組學測序：由于在轉錄組研究中通常所使用的第二代測序技術具有測序讀長的限制，因此在進行測序之前，需要先將樣本的mRNA打碎為小片段，之后再通過與參考基因組比對或拼接的方式識別轉錄本，這就會造成一定的錯誤比例，同時在也很難區分單堿基水平的差異。全長轉錄組測序的優勢：1、全方面鑒定可變剪切；2、發現更多新基因；3、有效改善基因組注釋；4、鑒定更多的LncRNA；5、準確定位融合基因。研究思路：由于全長轉錄組測序是基于第三代測序技術，因而其成本依然較高，如果全部研究項目均基于全長轉錄組，通常來說很難承擔，因此，全長轉錄組測序一般與普通轉錄組測序相結合。浙江宏轉錄學組研究內容轉錄組學包括：mRNA、ncRNA、rRNA等。

轉錄組學(transcriptomics)是功能基因組學(FunctionalGenomics)研究的重要組成部分，是一門在整體水平上研究細胞中所有基因轉錄及轉錄調控規律的學科。隨著人類基因組計劃HGP(HumanGenomeProject)的完成，科學家也逐漸認識到對基因結構序列的研究只是基因組學研究的一部分，并不能揭示所有的生命奧秘，所以接下來需要解決的問題是：研究這些基因序列的功能、參與的生命過程、表達調控方式，以及這些基因在不同的時空條件下的表達差異等。這些問題都需要功能基因組學技術來解決，而轉錄組學技術是功能基因組學研究的重要組成部分。對基因及其轉錄表達產物功能研究的功能基因組學，將為疾病控制和新藥開發、作物和畜禽品種的改良提供新思路，為人類解決健康問題、食物問題、能源問題和環境問題提供新方法。

RNA-Seq轉錄組學的應用：RNA-Seq即對轉錄組進行測序和分析。一般來說在研究所會委托公司測序得到數據自己進行后續的生信分析（質控，mapping，差異基因表達分析，SNV分析等）。RNA-Seq有著巨大的應用前景。在不同背景下比較mRNA水平同一物種，不同組織：研究基因在不同部分的表達情況。同一物種，同一組織：研究基因在不同處理下，不同條件下的表達變化。同一組織，不同物種：研究基因的進化關系。時間序列實驗：基因在不同時期的表達情況與發育的關系。基因分類：找到細胞特異，疾病相關，處理相關的基因表達模式，用于診斷疾病和預測等。基因網絡和通路：基因在細胞活動中的功能，基因間的相互作用。轉錄組學可以直接測定每個轉錄本片段序列。

單細胞RNA-seq轉錄組學工作流程：單細胞RNA測序等高通量單細胞轉錄組學技術通常從針對不同瘤和組織類型（解離、分選和分離細胞等）量身定制的實驗工作流程開始，然后產生可以比對的序列，量化、質量控制(QC)過濾和以不同方式標準化，以實現許多下游計算分析，例如聚類分析以識別轉錄不同的細胞類型和亞群，等位基因分析以識別單核苷酸變異（SNV，用星號表示）或拷貝數變體（CNV）、軌跡分析、剪接檢測或瘤的微環境（TME）相互作用的推斷中。單細胞轉錄組學數據的分析通常因精心設計的研究設計而變得復雜，這些設計可能包括來自患病和未患病個體的樣本、在不同時間點（例如，診療前和診療后）收集的同一個人的多個樣本，或來自表現出不同疾病狀態的不同個體的多個樣本。這樣的研究設計可以發現患者共享的轉錄特征，這些特征可能定義疾病中常見的干擾分子途徑。轉錄學組測序是目前深入研究轉錄組復雜性的強大工具。北京單細胞轉錄組學主要技術

轉錄學組測序能夠提供更準確的數字化信號。浙江宏轉錄學組研究內容

RNA-Seq轉錄組學技術優勢：相比基因芯片和標記的堿基序列的測序方法，RNA-seq具有一定的優越性。與基因芯片相比，RNA-Seq不只可以在更高的分辨率下用來測量基因的表達水平情況，還可以揭示未知的轉錄組和拼接亞型，并為選擇性拼接亞型提供定量分析。相對于傳統的芯片雜交平臺，轉錄組測序無需預先針對已知序列設計探針，即可對任意物種的整體轉錄活動進行檢測，提供更精確的數字化信號、更高的檢測通量以及更普遍的檢測范圍，是目前深入研究復雜性轉錄組的強大工具。鑒于這些優勢，RNA-Seq很快就被應用到關于瘤病相關研究的多個方面。浙江宏轉錄學組研究內容

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