單細胞轉錄組學測試步驟：第1步就是把單個細胞分選出來。分選的方式也比較多，物理切割，酶消化，FACS分選等。假如已經分到了一個單細胞，跟常規的轉錄組步驟上是一樣的。下一步就是把單細胞里的RNA提取出來去建庫測序。但是一個細胞里的RNA含量是比較少的，難建庫成功。這個里面“量”的概念很有意思。比如說單細胞量少，需要特殊處理。因為單細胞里面RNA的量少，所以說整個富集的過程中會出現一部分基因在一個細胞里能檢測到，在另外一個細胞里面檢測不到，而每個細胞里面的檢測存在一個隨機性，同時單細胞測序深度比較低，所以說分析時相比于普通轉錄組有一些是需要特別注意，但整體的分析思路是類似的。轉錄學組測序能夠提供更高的檢測通量。北京全轉錄學組服務

轉錄組是干什么用的，和表達譜有什么區別？轉錄組，指細胞某一時期所有基因的轉錄水平。轉錄組學，是一門在整體水平上研究細胞中基因轉錄的情況及轉錄調控規律的學科。簡而言之，轉錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況。對RNA的分析。分析應該是分幾個維度的DNA到RNA，RNA的剪切拼接，RNA的翻譯。表達譜有兩種，分別是基因表達譜和蛋白質表達譜。基因表達譜是指細胞中所有基因表達的格局。通過比較分析基因表達譜，可從整體水平研究代謝機制，認識基因相互作用的網絡關系，發現重要基因。廣東全長轉錄學組研究轉錄組學靈敏度高，可以檢測細胞中少至幾個拷貝的稀有轉錄本。

circRNA轉錄組學：是一類具有閉合環狀結構的非編碼RNA分子，沒有5′帽子結構和3′poly（A）結構，主要位于細胞質或儲存于外泌體中，不受RNA外切酶影響，表達更穩定且不易降解，已被證明普遍存在于多種真核生物體內[1]。大多數circRNA是由外顯子環化而成，也有部分circRNA是由內含子環化而成的套索結構。同時由于circRNA含有大量的miRNA應答原件（MREs），能與AGO蛋白形成RNA誘導沉默復合體（RISC）的催化關鍵，然后導致circRNA降解。根據來源，circRNA可大致分為四類：全外顯子型的circRNA，內含子和外顯子組合的EIcircRNA，內含子組成的套索型ciRNA，由病毒RNA基因組、tRNA、rRNA、snRNA等環化產生的circRNA。

轉錄組學測序流程：1、樣品RNA準備。2、測序文庫構建。3、DNA成簇(Cluster)擴增。4、高通量測序(Illumina)。5、數據分析。轉錄組的分析大致有以下幾種情況：1、同一物種在發育過程中的各時間節點的基因表達特點及存在的差異；2、不同品系之間存在的差異表達基因；3、不同的外界條件處理，如細菌、病毒、光照、紫外、干旱、高溫、高鹽脅迫，對基因表達的影響；4、同一個體，不同組織之間的基因表達差異。簡而言之，轉錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況。什么是轉錄組學測序？

單細胞轉錄組學技術：10×genomics技術：首先在凝膠微珠上種上特定的DNA的片段，DNA的片段由三部分組成：Barcode、UMI、PolyT組成。Barcode是16個堿基的長度。一共有400萬種Barcode，一個微珠是對應于一種Barcode，通過這400萬種Barcode，可以把凝膠微珠給區分開（通過barcode可以把cell分開）。UMI是一段隨機序列，也就是說每一個DNA分子，都有自己的UMI序列（一個微珠上有很多種UMI，通過UMI可以把RNA分子分開，并可以標記RNA分子的數量）。10個堿基長的UMI，有100萬種序列的變化（4^10=1,048,576），UMI的作用是為了區分哪些reads是來自于一個原始cDNA分子區分基因片段重復還是duplication及區分是真實的SNP位點還是PCR產生的突變。通過10×genomics儀器將單個細胞與單個凝膠微珠通過油相混在一起，形成油包水的小微滴。轉錄組學能準確地識別可變剪切位點及cSNP，UTR區域。廣東全長轉錄學組研究

轉錄組學測序比其他研究方法有哪些優勢?北京全轉錄學組服務

單細胞轉錄組關鍵步驟：單細胞的分離和捕獲：溫和分離，稀有細胞。轉錄本的捕獲和擴增：RNA測序需要0.1-1.0ugtotalRNA，捕獲效率10%（5-**NA測序需要1ngDNA，極限稀釋加移液分離單細胞；顯微操作分選單細胞；流式分選帶有表面Marker的單細胞；激光切割實體組織；微流控技術；磁珠捕獲，主要用于CTC。它的一個優點是可以結合流式細胞熒光分選（FACS,fluorescentactivatedcellsorting）根據表面Marker分選細胞。因此特別適合分選細胞子集用于測序。它的另一個優點是可以獲得細胞形態全覽圖，提供另外一個維度的信息，可用于鑒定微孔中是否有損傷的細胞或雙份細胞，主要缺點是通量低且每個細胞所需的工作量相當大。北京全轉錄學組服務

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