蛋白磷酸化檢測方法：質譜檢測方法優勢：1. 準確度高，能夠同時檢測多個蛋白的多個磷酸化位點。2. 適用于大規模分析蛋白磷酸化水平。3. 不依賴于磷酸化抗體。在實際應用中，Western Blot與質譜分析方法各有各的好，誰也無法完全被另一種方法所替代。所以在選擇測定磷酸化修飾的時候還應該根據具體需要來決定。如果研究的蛋白正好有商業化的磷酸化抗體，那么lucky you，你可以選擇Western Blot進行快速磷酸化測定研究。但是如果你所研究的蛋白質沒有可用的商業化磷酸抗體，或是抗體價效過低，亦或是需要大規模地檢測細胞內磷酸化蛋白的水平的話，質譜檢測會是更好地選擇。乙酰化修飾是體內高度保守的可逆轉的蛋白修飾。貴陽蛋白質氧化修飾組學質譜分析

蛋白質學組翻譯后修飾自下而上分析策略：常用的糖蛋白分離和富集技術有：a. 凝集素親和技術；b. 肼化學富集；c. 親水性相互作用色譜法；d. β-消除/邁克爾加成反應。基于質譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點測定方法有：a. PNGase F酶法；b. Endo H酶法；c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。泛素化：泛素是一種由76個氨基酸組成的多肽，在真核生物中高度保守，可通過異肽鍵與目標蛋白賴氨酸殘基的氨基進行共價連接。泛素化蛋白的富集主要基于標記，泛素用親和標簽（通常為6xHis）進行標記，并通過鎳螯合色譜親和提取泛素化蛋白。由于泛素的C端為Arg-Gly-Gly結構，經胰蛋白酶水解后，Gly-Gly保留在修飾蛋白的肽鏈上，使肽的質量增加114，因此可作為泛素定位位點的質量標記。用HPLC對樣品進行預分離，使用針對特定殘留結構的抗體富集泛素化肽，可很大程度上提高泛素化蛋白的濃度。串聯質譜可以鑒定泛素化位點。江蘇蛋白質丙酰化修飾組學領域蛋白質磷酸化修飾的免疫印跡技術優點：檢測特異性高。

質譜分析乙酰化蛋白質組：質譜分析技術可以對蛋白質組中的乙酰化蛋白進行鑒定、乙酰化位點定位以及定量。當質譜用于乙酰化定量蛋白組研究中時，因為乙酰化蛋白質在生物樣本中含量低、動態范圍廣，需要先對乙酰化肽段進行富集，然后再對富集得到的乙酰化肽段樣品進行定量分析。質譜定量乙酰化蛋白組采用肽段預分離降低高豐度蛋白的影響，結合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙酰化的肽段，從而實現大規模乙酰化的鑒定及定量。為了鑒定和定量更多的乙酰化肽段，在酶切過程中還可使用多種不同的酶對蛋白樣品進行酶切。

蛋白質糖基化修飾組學技術：糖基化是在酶的控制下,蛋白質或脂質附加上糖類的過程,發生于內質網和高爾基體等部位。在糖基轉移酶作用下將糖轉移至蛋白質,和蛋白質上的氨基酸殘基共價結合。蛋白質經過糖基化作用,形成糖蛋白。糖基化是對蛋白的重要的修飾作用,有調節蛋白質功能作用。凝素親和法是目前糖蛋白質組學中應用普遍的分離富集方法。凝集素（lectin）是一類糖結合蛋白質，能專一識別某一特殊結構的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結合，它們與糖鏈可逆非共價結合，糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后，通常用特定的單糖通過競爭結合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來。蛋白質經過酶解后利用凝集素（lectin）富集N-糖基化肽段，然后用N-糖酰胺酶（PNGase）在H218O中切除連接在天冬酰胺殘基（Asn）上的糖鏈。蛋白質翻譯后修飾組學磷酸化修飾具有簡單的特性。

蛋白質磷酸化修飾類型：根據磷酸氨基酸殘基的不同，可將磷酸化蛋白質分為4類，即O-磷酸鹽蛋白質、N-磷酸鹽蛋白質、酰基磷酸鹽蛋白質和S-磷酸鹽蛋白質。1、O-磷酸鹽蛋白質通過羥氨基酸（如絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸）的磷酸化形成。2、 N-磷酸鹽蛋白質通過精氨酸、賴氨酸或組氨酸的磷酸化形成。3、 酰基磷酸鹽蛋白質通過天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸鹽蛋白質通過半胱氨酸磷酸化形成。蛋白質磷酸化修飾鑒定方法：免疫印跡技術是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的、根據特定抗原-抗體的特異性反應來檢測復雜樣品中的某種蛋白質的免疫生化分析方法。在細胞中，乙酰化修飾的反應由乙酰基轉移酶所催化，將乙酰輔酶A的乙酰基轉移并添加在蛋白質賴氨酸殘基上。湖北蛋白質棕櫚酰化修飾組學類型

蛋白質乙酰化修飾組學技術對細胞核內轉錄調控因子的刺激有著重要的作用。貴陽蛋白質氧化修飾組學質譜分析

蛋白質學組翻譯后修飾的研究策略：自中而下：自中而下的分析方法是自下而上分析方法的一種替代方法，分析組蛋白時其原理類似于自下而上分析策略。在使用這種分析方法時，通常需要將被檢測蛋白質消化成3-9kDa范圍內的肽段，因此也無法保證檢測到的肽段的完整性。但是，由于儀器的進步和保留了組蛋白尾部的組合修飾，自中而下分析法正逐漸受到歡迎。自中而下更接近于自下而上法的靈敏度。自上而下：自上而下技術可以直接對完整的蛋白質進行測序，包括翻譯后修飾的蛋白質和其他大的蛋白質片段，而不只是肽段。這可以比較大程度地保留與PTMs相關的信息，使其適用于組蛋白的全方面表征和分析。自上而下技術對蛋白質的有效分辨率已達到229kDa，一次可以檢測到的蛋白質數量也在增加。貴陽蛋白質氧化修飾組學質譜分析

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