蛋白組學研究怎么做？PRM:平行反應監測(ParallelReactionMonitoring)是一種基于高分辨、高精度質譜的離子監視技術，能夠對目標蛋白質、目標肽段（如發生翻譯后修飾的肽段）進行選擇性檢測，從而實現對目標蛋白質/肽段進行一定定量，因此也被稱之為基于液相色譜質譜聯用技術的WesternBlot（LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB）。PRM技術基于Q-Orbitrap為表示的高分辨、高精度質譜平臺，首先利用四級桿質量分析器的選擇能力，用Q1選擇目標肽段的母離子，隨后在Collisioncell中對母離子進行碎裂，之后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析。蛋白質組學技術有電噴霧質譜。湖北外泌體蛋白質組學研究

定量蛋白質組學方法學介紹：Label-free：Label-free定量，即非標記的定量蛋白質組學，不需要對比較樣本做特定標記處理，只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質譜響應信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化，通常用于分析大規模蛋白鑒定和定量時所產生的質譜數據。Label-free定量不需要標記處理，操作簡單，可以做任意樣本的總蛋白質差異定量，但對實驗操作的穩定性、重復性要求較高，準確性也較標記定量差。因此，Label-free技術適合于大樣本量的定量比較，以及對無法用標記定量實現的實驗設計。武漢定量蛋白組學分析研究蛋白質組的概念指由一個基因組，或一個細胞、組織表達的所有蛋白質。

我們究竟怎么研究蛋白質組學呢？目前高通量檢測蛋白質的方法中，還是首推基于質譜的方法，納流液相可以將復雜樣品中的肽段高效地分離，然后依次進入質譜，對每個被離子化的肽段及其碎裂后碎片的荷質比進行分析，從而得到該肽段的序列信息，然后根據對應的色譜峰面積或者報告離子強度等信息，我們又可以得到該肽段的定量信息。蛋白組學研究怎么做？當下蛋白組學研究中應用比較普遍的技術是同位素標記定量（iTRAQ/TMT技術）。iTRAQ/TMT技術是利用DDA掃描模式，其掃描的方式是將一級質譜信號比較強的Top20的多肽進行二級打碎，然后進入二級質譜進行檢測。其優勢是二級譜圖采集的肽段信息都來源于同一條多肽，有利于后續的定性分析。

蛋白質組學在醫學的研究應用：蛋白質組學(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質組成、定位、變化及其相互作用規律的科學，包括對蛋白質表達模式和蛋白質組功能模式的研究。蛋白質組學的發展對尋找疾病的診斷標志、篩選藥物靶點、毒理學研究等有重要意義，也因此被普遍應用于醫學研究。蛋白質組學研究，總體可分為一下幾個步驟：（1）差異篩選（Discovery）（2）初步驗證（Verification）（3）然后確診（Validation）。基于質譜的蛋白質組學是目前比較主流的高通量蛋白質研究手段，當前在醫療健康方面的應用主要集中于基礎研究和轉化醫學。近兩年來蛋白質組研究技術已被應用到各種生命科學領域，如細胞生物學、神經生物學等。

蛋白質組學主要以全蛋白組（組織、細胞）、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象，通過對蛋白組進行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析，揭示生物學功能、作用機制、疾病診斷的標志物以及預測蛋白的上、下游變化關系。蛋白質組學可以克服核酸水平預測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術：非靶向蛋白組學：蛋白質定性（膠條鑒定和溶液鑒定），高通量定量蛋白組（Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量），多肽組學。蛋白質組學技術有飛行時間質譜。浙江PRM靶向定量蛋白質組學

蛋白質組學的研究方法將出現多種技術并存。湖北外泌體蛋白質組學研究

蛋白質組學是以蛋白質組為研究對象，研究細胞、組織或生物體蛋白質組成及其變化規律的科學。蛋白質組學研究不只是探索生命奧秘的必須工作，也能為人類健康事業帶來巨大的利益，是生命科學進入后基因時代的特征。蛋白質是生命存在和運動的物質基礎，是細胞增殖、分化、衰老和凋亡等重大生命活動的執行者，亦是基因功能活動的執行者，是生命現象復雜性和多變性的直接體現者。蛋白質組研究是為了識別及鑒定一個細胞或組織所表達的全部蛋白質以及它們的表達模式，是對基因組研究的重要補充，是對生物體在蛋白質水平上定量、動態、整體性的研究。這類研究有助于了解蛋白的結構、細胞的功能、生命的本質及活動規律，為疾病的診斷、診療、疫苗及新藥開發提供科學依據。湖北外泌體蛋白質組學研究

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