蛋白質磷酸化修飾類型:根據磷酸氨基酸殘基的不同,可將磷酸化蛋白質分為4類,即O-磷酸鹽蛋白質、N-磷酸鹽蛋白質、酰基磷酸鹽蛋白質和S-磷酸鹽蛋白質。1、O-磷酸鹽蛋白質通過羥氨基酸(如絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸)的磷酸化形成。2、 N-磷酸鹽蛋白質通過精氨酸、賴氨酸或組氨酸的磷酸化形成。3、 酰基磷酸鹽蛋白質通過天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸鹽蛋白質通過半胱氨酸磷酸化形成。蛋白質磷酸化修飾鑒定方法:免疫印跡技術是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的、根據特定抗原-抗體的特異性反應來檢測復雜樣品中的某種蛋白質的免疫生化分析方法。乙酰化修飾是體內保守的可逆轉的蛋白修飾。杭州泛素化修飾蛋白質組學主要技術
翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質翻譯后修飾是影響蛋白質功能并調節整個細胞過程的重要方式,幾乎在每個細胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質對揭示蛋白質的功能和深入了解各種生理現象具有重要意義。大多數翻譯后修飾蛋白以低化學計量和豐度存在,這限制了在分析全細胞裂解液時對其的檢測。因此,要在蛋白質組學的范圍內表征翻譯后修飾蛋白,純化方法是必要的,以分離修飾蛋白和肽段,然后再進行后續分析。后續分析一般采用質譜技術進行,可以對翻譯后修飾蛋白組進行定性和定量研究。浙江蛋白質磷酸化修飾組學領域蛋白質的磷酸化修飾是生物體內重要的共價修飾方式之一。
蛋白質翻譯后修飾分析策略:早期蛋白質組研究的大部分工作集中在細胞生長的不同時期,或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質表達水平的變化。然而,許多生命過程不只受蛋白質的相對豐度控制,還受時空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此,揭示翻譯后修飾的規律是了解蛋白質復雜性和多樣的生物學功能的前提。蛋白質的翻譯后修飾是一個復雜的過程。目前,發現的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質含量低、動態范圍廣給相關研究帶來了很大的挑戰。基于翻譯后修飾蛋白的異質性和相對豐度低的特點,主要利用凝膠、生物質譜和生物信息學工具對其進行研究。用于PTM分析的質譜方法類似于用于“常規”蛋白質鑒定的方法,包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質組學分析。
蛋白質乙酰化修飾鑒定流程:1. 組織/細胞破碎,提取、提純目的蛋白質。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特異性乙酰化抗體對乙酰化修飾肽段進行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS對富集的乙酰化肽段進行鑒定分析。5. 數據分析,并對鑒定的乙酰化位點的生物學功能進行解釋預測。隨著蛋白質組研究的發展,我們越來越深刻地意識到,對于生物體生命活動的管理和調控過程,密切相關的不只是單個蛋白質層面的修飾狀態,更重要的是研究蛋白質組學水平研究在翻譯后修飾的動態變化。高質、高效的蛋白質翻譯后修飾富集技術和豐富的、準確的定量手段使得研究蛋白質水平的翻譯后修飾組學成為現實,借助這些組學研究手段能夠實現不同生理病理狀態下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較,深入地揭示翻譯后修飾水平的波動與生物生命活動的密切聯系。蛋白質乙酰化修飾,顧名思義指的就是在蛋白質原有基礎上面嫁接上乙酰化基團。
蛋白質翻譯后修飾:蛋白質的翻譯后修飾通過可逆的共價鍵將小分子或蛋白質與底物蛋白質上特定的氨基酸結合,調控著底物的酶活性、功能以及三級結構的變化。各種蛋白質翻譯后修飾在信號通路和網絡中發揮著重要的作用,翻譯后修飾系統的紊亂將導致一系列疾病的發生。通過實驗的方法鑒定蛋白質翻譯后修飾的位點需要耗費大量的資金和時間,并且酶反應的優化常常難以實現。而計算的方法則能夠快速、準確的預測酶特異性的底物蛋白質及其修飾位點。蛋白質糖基化是一種常見的蛋白質翻譯后修飾。浙江蛋白質磷酸化修飾組學領域
常見的蛋白質翻譯后修飾包括泛素化。杭州泛素化修飾蛋白質組學主要技術
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