蛋白質翻譯后修飾組學技術原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進行組分分離以降低樣本復雜程度,然后通過高質量的修飾類抗體和生物材料對修飾肽段進行富集,之后上樣至液相色譜 - 串聯質譜中進行分析,通過相應的數據庫檢索匹配,一次可鑒定成百上千個修飾位點。蛋白質磷酸化位點分析樣品經酶解后,用 TiO2 微球對磷酸化肽段進行富集,富集后的產物由質譜分析,并通過軟件完成數據檢索。琥珀酰化修飾蛋白質組技術特點:采用主流抗體親和富集方法,特異性高,富集效率好。在眾多乙酰化修飾的蛋白質中,研究較多的要數細胞核中包圍DNA的組蛋白了。廣東糖基化修飾蛋白質組學有哪些
琥珀酰化修飾蛋白質組:蛋白質琥珀酰化(succinylation)修飾是指琥珀酰基團供體(如琥珀酰輔酶A)通過酶學或者非酶學的方式將琥珀酰基團共價結合到底物蛋白質的賴氨酸殘基的過程。琥珀酰化修飾賦予賴氨酸基團2個負電荷,能夠引發更多蛋白質特性的改變,且琥珀酰基團空間結構較大,對于蛋白質結構和功能的影響更為明顯。在真核和原核生物中,琥珀酰化是一種保守的修飾類型。琥珀酰化和乙酰化具有非常強的相關性,在已有的研究中,大量發生琥珀酰化的位點同時也能檢測到乙酰化修飾。琥珀酰化參與了很多關鍵能量代謝途徑(包括三羧酸循環、糖代謝等),影響線粒體中的代謝過程,對線粒體失調相關的疾病的研究具有重要價值。哈爾濱泛素化修飾蛋白質組學質譜鑒定蛋白質翻譯后修飾組學是什么?
甲基化修飾蛋白質組學技術原理:目前用于甲基化蛋白質組分析的甲基化肽段富集抗體分為精氨酸甲基化(Me-R)抗體和賴氨酸甲基化(Me-K)抗體兩大類。根據氨基酸殘基上所含甲基化修飾基團數量的不同,精氨酸甲基化(Me-R)抗體又包括:單甲基化精氨酸(MMA)抗體、非對稱二甲基化精氨酸(ADMA)抗體和對稱二甲基化精氨酸(SDMA)抗體;賴氨酸甲基化(Me-K)抗體又包括:賴氨酸單甲基化(K-Me)抗體、賴氨酸二甲基化(K-2Me)抗體和賴氨酸三甲基化(K-3Me)抗體。其中,Me-R的各類抗體需要單獨使用,而Me-K抗體可以混合使用。
泛素化修飾蛋白質組學樣品要求:1、動物組織的樣品量濕重不少于200mg。2、植物細菌、噬菌體等微生物類樣品量濕重不少于2g。3、富含雜質或蛋白質含量低的樣品量濕重不少于5g;如植物的根,木質部、韌皮部組織等。4、體液類(唾液、羊水、腦脊液等)10mL以上,要保證不能溶血;血清要求500μl以上;尿液要求50mL以上。5、如直接提供蛋白質提取物,濃度不少于2 mg/mL,總量不少于1 mg。為保證實驗效果,請盡量告知緩沖液成分,如是否有硫脲、SDS、強離子鹽等等。另樣品中應不含核酸、脂類、多糖等影響分離效果的成分。6、在細胞器蛋白質組學方面,提取細胞器或亞細胞器后,蛋白沉淀量在1 mg以上。在細胞中,乙酰化修飾的反應由乙酰基轉移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙酰基轉移并添加在蛋白質賴氨酸殘基上。
乙酰化修飾蛋白組學應用方向有什么?1、基礎醫學、臨床診斷:生物標志物,疾病機理機制,疾病分型,個性化治理等;2、生物醫藥:藥物作用機理,藥效評價,藥物開發等;3、微生物領域:致病機理,耐藥機制,病原體-宿主相互作用研究等;4、海洋水產:漁業資源,海水養殖,漁業環境與水產品安全等;5、生物能源、環境科學領域:發酵過程優化,生物燃料生產,環境危定風險評估研究等;6、食品營養:食品儲藏及加工條件優化,食品組分及品質鑒定,功能性食品開發,食品安全監檢測等。已知的蛋白質翻譯后修飾種類有20多種。山東蛋白質琥珀酰化修飾組學技術服務
蛋白質翻譯后修飾組學對于蛋白質修飾位點的發現及研究對闡明蛋白質的功能具有重要作用。廣東糖基化修飾蛋白質組學有哪些
泛素化修飾蛋白組學研究:泛素化修飾蛋白組學是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統介導了真核生物體內80%~85%的蛋白質降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質的活性和定位,調控包括細胞周期、細胞凋亡、轉錄調控、DNA 損傷修復以及免疫應答等在內的多種細胞活動。由于翻譯后修飾的蛋白質在生物樣本中含量低、動態范圍廣,質譜分析前需要對修飾進行富集以提高其豐度,然后利用傳統的定量蛋白組分析手段對富集得到的泛素化肽段樣品進行定量分析。廣東糖基化修飾蛋白質組學有哪些