轉(zhuǎn)錄組是特定發(fā)育階段或生理條件下細胞內(nèi)的完整轉(zhuǎn)錄信息的匯合,表示了基因表達的中間狀態(tài)。轉(zhuǎn)錄組測序可以對所有轉(zhuǎn)錄物進行分類、確定基因的轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)、量化轉(zhuǎn)錄物的表達水平。蛋白質(zhì)是生命功能的直接執(zhí)行者,蛋白組是一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質(zhì)。整合轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的表達數(shù)據(jù)對生物樣本進行研究,可以從整體上解釋生物學(xué)問題,探究生物體生理和疾病機理等。轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用于胃腸瘤發(fā)生機制研究:利用轉(zhuǎn)錄組學(xué)可檢測瘤細胞惡化過程中的RNA(編碼RNA及非編碼RNA)的變化,有助于更好地理解胃腸瘤的發(fā)生機制。相對于傳統(tǒng)的芯片雜交平臺,轉(zhuǎn)錄學(xué)組測序無需預(yù)先針對已知序列設(shè)計探針。上海外泌體轉(zhuǎn)錄組學(xué)鑒定
轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用于胃腸瘤轉(zhuǎn)移機制研究:circRNA是一種非編碼RNA,可以多種方式參與生物學(xué)功能,如細胞增殖、細胞周期、侵襲和轉(zhuǎn)移等。近年來研究發(fā)現(xiàn),環(huán)狀RNA可以通過海綿吸附微小RNA和RNA結(jié)合蛋白參與轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,從而影響瘤耐藥過程中的DNA修復(fù)、凋亡、增殖、細胞轉(zhuǎn)運,以及介導(dǎo)瘤耐藥的細胞內(nèi)酶,進而在瘤耐藥中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域:農(nóng)林領(lǐng)域:生長發(fā)育機制,抗逆脅迫機制,育種,物種保護研究等;畜牧業(yè):生長發(fā)育機制,致病機理研究,肉類及乳制品品質(zhì)研究等。貴陽單細胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)服務(wù)轉(zhuǎn)錄組廣義上指在某一生理條件下,細胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄組產(chǎn)物的組合。
單細胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)測試步驟:第1步就是把單個細胞分選出來。分選的方式也比較多,物理切割,酶消化,F(xiàn)ACS分選等。假如已經(jīng)分到了一個單細胞,跟常規(guī)的轉(zhuǎn)錄組步驟上是一樣的。下一步就是把單細胞里的RNA提取出來去建庫測序。但是一個細胞里的RNA含量是比較少的,難建庫成功。這個里面“量”的概念很有意思。比如說單細胞量少,需要特殊處理。因為單細胞里面RNA的量少,所以說整個富集的過程中會出現(xiàn)一部分基因在一個細胞里能檢測到,在另外一個細胞里面檢測不到,而每個細胞里面的檢測存在一個隨機性,同時單細胞測序深度比較低,所以說分析時相比于普通轉(zhuǎn)錄組有一些是需要特別注意,但整體的分析思路是類似的。
circRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué):是一類具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子,沒有5′帽子結(jié)構(gòu)和3′poly(A)結(jié)構(gòu),主要位于細胞質(zhì)或儲存于外泌體中,不受RNA外切酶影響,表達更穩(wěn)定且不易降解,已被證明普遍存在于多種真核生物體內(nèi)[1]。大多數(shù)circRNA是由外顯子環(huán)化而成,也有部分circRNA是由內(nèi)含子環(huán)化而成的套索結(jié)構(gòu)。同時由于circRNA含有大量的miRNA應(yīng)答原件(MREs),能與AGO蛋白形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RISC)的催化關(guān)鍵,然后導(dǎo)致circRNA降解。根據(jù)來源,circRNA可大致分為四類:全外顯子型的circRNA,內(nèi)含子和外顯子組合的EIcircRNA,內(nèi)含子組成的套索型ciRNA,由病毒RNA基因組、tRNA、rRNA、snRNA等環(huán)化產(chǎn)生的circRNA。circRNA主要存在于細胞質(zhì)或外泌體中,具有組織特異性、疾病特異性、時序特異性及高穩(wěn)定性等特征。
RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)優(yōu)勢:相比基因芯片和標記的堿基序列的測序方法,RNA-seq具有一定的優(yōu)越性。與基因芯片相比,RNA-Seq不只可以在更高的分辨率下用來測量基因的表達水平情況,還可以揭示未知的轉(zhuǎn)錄組和拼接亞型,并為選擇性拼接亞型提供定量分析。轉(zhuǎn)錄組學(xué)(Transcriptomics),是一門在真整體水平上研究細胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科,從RNA水平研究基因的表達情況。轉(zhuǎn)錄組測序是通過二代測序平臺快速全方面地獲得某一物種特定細胞或組織在某一狀態(tài)下的幾乎所有的轉(zhuǎn)錄本及基因序列,可以用來研究基因表達量、基因功能、結(jié)構(gòu)、可變剪接和預(yù)測新的轉(zhuǎn)錄本等等。轉(zhuǎn)錄組學(xué)廣義上指在某一生理條件下,細胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄組產(chǎn)物的組合。貴陽單細胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)服務(wù)
轉(zhuǎn)錄組學(xué)有高通量、更精確的數(shù)字信號。上海外泌體轉(zhuǎn)錄組學(xué)鑒定
RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)優(yōu)勢有:1、可以直接測定每個轉(zhuǎn)錄本片段序列、單核苷酸分辨率的準確度;2、靈敏度高,可以檢測細胞中少至幾個拷貝的稀有轉(zhuǎn)錄本;3、可以對任意物種進行全基因組分析,能夠檢測未知基因,發(fā)現(xiàn)新的轉(zhuǎn)錄本,并準確地識別可變剪切位點及cSNP,UTR區(qū)域;4、檢測范圍廣,能夠同時鑒定和定量稀有轉(zhuǎn)錄本和正常轉(zhuǎn)錄本。RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)是需要生物學(xué)重復(fù)的,至少需要兩次生物學(xué)重復(fù),3次以上的生物學(xué)重復(fù)更好。以3個重復(fù)為例,加上對照的三個生物學(xué)重復(fù),一次RNA-seq需要6個樣本。上海外泌體轉(zhuǎn)錄組學(xué)鑒定