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江蘇常規蛋白質組學分析研究

來源: 發布時間:2022-04-19

定量蛋白質組學的方法學背景和意義:從生命活動的直接執行者——蛋白質的角度研究生命現象和規律(特別是疾病防治和病理研究)已成為研究生命科學的主要手段。而這些研究往往離不開對細胞、組織中含有蛋白質種類和表達量的研究。對處不同時期、不同條件下蛋白質表達水平變化的研究,識別功能模塊和路徑,監控疾病的生物標志物,這些研究都需要對蛋白質進行鑒定和定量。生物質譜技術的出現和不斷成熟為蛋白質差異表達分析提供了更可靠、動態范圍更廣的研究手段。基于質譜技術,科學家們不斷開發出新的定量蛋白質組學方法,來了解細胞、組織或生物體的整體蛋白質動力學。蛋白質組學技術的發展已經成為現代的生物技術快速發展的重要支撐。江蘇常規蛋白質組學分析研究

PRM靶向定量蛋白質組學分析流程是怎樣的?要做PRM首先要明確目標蛋白(或多肽)是什么,設計和建立針對這些目標蛋白PRM質譜采集方法,然后對待測樣品進行PRM數據采集,將得到的原始譜圖數據導入分析軟件提取子離子信息進行定量。另外,如果配制已知濃度的標準肽段,用PRM額外做一個標準曲線,即可實現一定的定量。PRM靶向定量蛋白質組學技術能應用到哪些方面?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術來實現。具體說來,比如驗證定量蛋白質組學中某些蛋白的變化,多肽的相對和一定的定量,想做蛋白定量卻沒有抗體,針對蛋白修飾位點的定量,想同時定量多個蛋白的情況等,都可以用PRM來做。江蘇常規蛋白質組學分析研究對人類而言,蛋白質組學的研究要服務于人類的健康,主要指促進分子醫學的發展。如尋找藥物的靶分子。

LabelFree(非標記蛋白質組學技術):在非標記策略的定量模型中,主要涉及兩種不同的算法:其一,以肽段的色譜峰積分面積為基礎,通過比較一對生物樣品中相對應到蛋白質酶解多肽的色譜積分面積而得到兩者的相對豐度;其二,以肽段被質譜檢測的計數為基礎,通過歸一化來表征被檢測蛋白質的相對豐度。非標記技術認為肽段在質譜中被捕獲檢測的頻率(Counts)與其在混合物中的豐度成正相關,因此蛋白質被質譜檢測的計數反映了蛋白質的豐度,通過適當的數學公式可以將質譜檢測計數與蛋白質的量聯系起來,從而對蛋白質進行定量。

iTRAQ定量蛋白組學技術:iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)定量蛋白質組學技術多肽體外標記定量技術。這種技術同TMT定量蛋白組學技術相似,可研究不同病理條件下或者不同發育階段的組織樣品中蛋白質表達水平的差異。Label-free:Label-free定量,即非標記的定量蛋白質組學,不需要對比較樣本做特定標記處理,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質譜響應信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化,通常用于分析大規模蛋白鑒定和定量時所產生的質譜數據。非標記定量蛋白質組學技術可以對不同物種和不同的樣本類型可以同時開展蛋白定量分析。

蛋白質組學的目標是要回答關于蛋白質的4個方面的問題:①細胞中蛋白質的含量。②定位。③活性。④修飾。蛋白質組學的研究方法主要有:①蛋白質雙向電泳。②氨基酸序列測定(包括N端測序和C端測序)。③質譜。④生物信息學。發育蛋白質組學指在某一特定的生長發育時期,在特定的生長條件下,特定的細胞、組織中所表達的所有蛋白質。發育蛋白質組學揭示了在每個特定時期所表達的蛋白質和這些不同的蛋白質在特殊的生長時期可能發揮的作用,是進一步了解和深入研究蛋白質功能的基礎。蛋白質組學將成為尋找疾病分子標記和藥物靶標有效的方法之一。江蘇常規蛋白質組學分析研究

蛋白質組學本質上指的是在大規模水平上研究蛋白質的特征。江蘇常規蛋白質組學分析研究

蛋白質組學主要以全蛋白組(組織、細胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,通過對蛋白組進行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學功能、作用機制、疾病診斷的標志物以及預測蛋白的上、下游變化關系。蛋白質組學可以克服核酸水平預測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。常用技術:非靶向蛋白組學:蛋白質定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學。江蘇常規蛋白質組學分析研究