蛋白質翻譯后修飾在蛋白質中磷酸化位點分析時應該注意些什么問題？覆蓋率：覆蓋率越高，檢測和鑒定含有修飾基團的肽幾率就越大。修飾位點的占有率：被修飾的蛋白質的百分比低，則檢測到修飾肽的機會會隨之減少。如果百分比較高（> 30％），則有助于識別修飾位點。棕櫚酰化蛋白修飾質譜鑒定方法：S-棕櫚酰化的主要功能是促進蛋白質與細胞膜的結合。蛋白質可以由一個棕櫚酰基組成，也可以與更多棕櫚基或與其他脂質，如豆蔻?；?。由于對S-棕櫚酰化蛋白分析仍然具有挑戰性，由于S-棕櫚酰化修飾蛋白亞水平以及疏水性和潛在不穩定的硫代質鏈的S-脂?；?。在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中，蛋白會首先被酶切成肽段，然后進入質譜進行分析。貴州丙二?；揎椀鞍踪|組學分析研究

蛋白質翻譯后修飾自中而下分析策略：自中而下的蛋白質組學技術可用于組蛋白修飾的分析。樣品制備與普遍使用的自下而上的分析策略相同，直到得到純化的組蛋白。提取組蛋白后，用GluC進行消化。然后用弱陽離子交換/親水相互作用色譜（WCX-HILIC）與配備電子轉移解離（ETD）的高分辨率質譜聯機聯用，對樣品進行理想的分離。譜識別可以用傳統的軟件進行，但是由于估計適當的錯誤發現率的問題，需要對結果進行過濾。自上而下分析策略：自上而下的技術可以直接引入完整的蛋白質并在串聯質譜儀上對其進行片段化，不需要蛋白質水解消化。目前，有兩種完全分離蛋白質的方法：離線和在線。前者用四維分離法，后者用WCX-HILIC。杭州氧化修飾蛋白質組學方法研究蛋白質磷酸化對闡明蛋白質功能具有重要意義。

蛋白質翻譯后修飾分析策略：早期蛋白質組研究的大部分工作集中在細胞生長的不同時期，或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質表達水平的變化。然而，許多生命過程不只受蛋白質的相對豐度控制，還受時空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此，揭示翻譯后修飾的規律是了解蛋白質復雜性和多樣的生物學功能的前提。蛋白質的翻譯后修飾是一個復雜的過程。目前，發現的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質含量低、動態范圍廣給相關研究帶來了很大的挑戰?；诜g后修飾蛋白的異質性和相對豐度低的特點，主要利用凝膠、生物質譜和生物信息學工具對其進行研究。用于PTM分析的質譜方法類似于用于“常規”蛋白質鑒定的方法，包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質組學分析。

泛素化修飾蛋白質組學的作用：泛素化、心血管等疾病的發病密切相關。因此，作為近年來生物化學研究的一個重大成果，它已然成為研究、開發新藥物的新靶點。技術原理是首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物，然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進行組分分離以降低樣本復雜程度，然后通過高質量的泛素化修飾抗體和生物材料對修飾肽段進行富集，之后上樣至液相色譜-串聯質譜中進行分析定量。技術優勢：高特異性的修飾抗體；高分辨率、高靈敏度質譜儀；鑒定通量高；可與代謝組學等進行多組學聯合分析。常見的蛋白質翻譯后修飾包括泛素化。

乙?；揎椀鞍捉M學應用方向有什么？1、基礎醫學、臨床診斷：生物標志物，疾病機理機制，疾病分型，個性化治理等；2、生物醫藥：藥物作用機理，藥效評價，藥物開發等；3、微生物領域：致病機理，耐藥機制，病原體-宿主相互作用研究等；4、海洋水產：漁業資源，海水養殖，漁業環境與水產品安全等；5、生物能源、環境科學領域：發酵過程優化，生物燃料生產，環境危定風險評估研究等；6、食品營養：食品儲藏及加工條件優化，食品組分及品質鑒定，功能性食品開發，食品安全監檢測等。蛋白質翻譯后修飾組學自中而下的蛋白質組學技術可用于組蛋白修飾的分析。浙江蛋白質亞硝基化修飾組學主要技術

蛋白質翻譯后修飾在許多細胞過程中起著關鍵作用。貴州丙二?；揎椀鞍踪|組學分析研究

蛋白質糖基化修飾組學技術怎么確定位點？蛋白質經過酶解后利用凝集素（lectin）富集N-糖基化肽段，然后用N-糖酰胺酶（PNGase）在H218O中切除連接在天冬酰胺殘基（Asn）上的糖鏈。該處理致使Asn分子量增加2.9890Da。之后用高精度LC-MS質譜儀檢測脫糖后的肽段，并通過MASCOT軟件檢索數據庫，確認脫糖后分子量與其理論分子量的變化以及糖基化修飾肽段的序列，從而確定該蛋白質的N-糖基化位點。琥珀酰化修飾蛋白質組技術特點：采用主流抗體親和富集方法，特異性高，富集效率好。貴州丙二?；揎椀鞍踪|組學分析研究