乙?;揎椀鞍捉M學應用方向有什么?1、基礎醫學、臨床診斷:生物標志物,疾病機理機制,疾病分型,個性化治理等;2、生物醫藥:藥物作用機理,藥效評價,藥物開發等;3、微生物領域:致病機理,耐藥機制,病原體-宿主相互作用研究等;4、海洋水產:漁業資源,海水養殖,漁業環境與水產品安全等;5、生物能源、環境科學領域:發酵過程優化,生物燃料生產,環境危定風險評估研究等;6、食品營養:食品儲藏及加工條件優化,食品組分及品質鑒定,功能性食品開發,食品安全監檢測等。蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質譜進行分析。浙江蛋白質丙二?;揎椊M學領域
什么是蛋白質的翻譯后修飾?蛋白質的翻譯后修飾()是指蛋白質在翻譯后的化學修飾。對于大部分的蛋白質來說,這是蛋白質生物合成的較后步驟。PTM是細胞信號傳導中的重要組成部分。通過向修飾基團添加一個或多個氨基酸殘基或通過蛋白質水解切割該基團來改變蛋白質的性質,是蛋白質生物學功能表達的重要步驟。生物蛋白質的翻譯后修飾極大地增加了蛋白質結構的類型和功能。這個過程調節細胞周期和蛋白質轉錄,并影響表觀遺傳學。武漢泛素化修飾PRM定量驗證已知的蛋白質翻譯后修飾種類有20多種。
泛素化修飾蛋白組學研究:泛素化修飾蛋白組學是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統介導了真核生物體內80%~85%的蛋白質降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質的活性和定位,調控包括細胞周期、細胞凋亡、轉錄調控、DNA 損傷修復以及免疫應答等在內的多種細胞活動。由于翻譯后修飾的蛋白質在生物樣本中含量低、動態范圍廣,質譜分析前需要對修飾進行富集以提高其豐度,然后利用傳統的定量蛋白組分析手段對富集得到的泛素化肽段樣品進行定量分析。
蛋白磷酸化檢測方法:一、Western Blot檢測方法優勢:1. WB方法簡便,多數實驗室具備Western Blot設備條件。2. 許多磷酸化抗體十分靈敏,能夠檢測低至10ug的蛋白樣品。3. 對于豐度低的蛋白,可以先通過IP使用目標蛋白的抗體對目標蛋白進行富集,再進行WB檢測被磷酸化的蛋白,檢測效率可以提高幾倍甚至幾十倍。二、質譜檢測方法:Western Blot的方法雖然簡便,但是對于大規模分析復雜的生物樣品的磷酸化水平就不再適用了。而質譜卻能很好的解決這一問題。依靠高準確度質譜儀,如今快速準確分析細胞中高豐度蛋白的磷酸化修飾已是非常簡單的事。具體的檢測方法為先通過SDS-PAGE膠,或者2D-PAGE膠等分離目標蛋白,將含有目標蛋白的條帶切下,胰酶消化,LC-MS/MS檢測分析蛋白序列和相應位點的磷酸化修飾。這個方法適用于同時檢測多個目標蛋白的磷酸化水平。蛋白質翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質的功能。
蛋白質乙?;揎椊M學定量分析:1. SILAC細胞標記,組織/細胞破碎,提取、提純目的蛋白質(基于SILAC的乙?;揎椊M學定量)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 對多肽片段進行iTRAQ標記(基于iTRAQ的乙?;揎椊M學定量)。4. 使用高效特異性乙?;贵w對乙?;揎楇亩芜M行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對富集的乙?;亩芜M行序列分析。6. 數據分析,比對不同樣本中蛋白乙酰化修飾水平差異,并對產生變化的生物學意義進行解釋。蛋白質翻譯后修飾組學磷酸化修飾具有靈活的特性。浙江蛋白質丙二?;揎椊M學領域
大多數翻譯后修飾蛋白以低化學計量和豐度存在,這限制了在分析全細胞裂解液時對其的檢測。浙江蛋白質丙二?;揎椊M學領域
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