轉錄組學應用領域:海洋水產:生長發育機制,漁業資源,漁業環境與水產品安全等;微生物:致病機理,耐藥機制,病原體-宿主相互作用研究等;生物醫藥:生物標志物,疾病機理機制,疾病分型,藥物開發,個性化醫治等;環境科學:發酵過程優化,生物燃料生產,環境危害風險評估研究等;食品科學:食品儲藏及加工條件優化,食品組分及品質鑒定,功能性食品開發,食品安全監檢測等。轉錄組是特定發育階段或生理條件下細胞內的完整轉錄信息的匯合,表示了基因表達的中間狀態。轉錄組學可應用于非生物環境關系研究、植物與微生物、在表型鑒定中的應用、代謝途徑及功能基因組研究。廣州高通量轉錄組學定性分析
轉錄組及轉錄組測序(RNA-seq):轉錄組即特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。轉錄組測序(RNA-seq)主要通過高通量測序研究特定組織或細胞在某個時期轉錄出來的mRNA的表達量,進而對相關基因和表型的關系進行分析。本質上講RNA-seq就是在用一種新的方法實現“基因決定性狀”的經典思路。在RNA-seq之前用于研究基因組表達分析的主要技術是基因芯片,不過由于高通量測序成本的下降,RNA-seq的運用愈來愈普遍。廣東單細胞轉錄組學分析方法轉錄組學是研究細胞表型和功能的一個重要手段。
轉錄組學測序比其他研究方法有哪些優勢?(1)可以直接測定每個轉錄本片段序列、單核苷酸分辨率的準確度,同時不存在傳統微陣列雜交的熒光模擬信號帶來的交叉反應和背景噪音問題;(2)靈敏度高,可以檢測細胞中少至幾個拷貝的稀有轉錄本;(3)可以對任意物種進行全基因組分析,無需預先設計特異性探針,因此無需了解物種基因信息,能夠直接對任何物種進行轉錄組分析,同時能夠檢測未知基因,發現新的轉錄本,并準確地識別可變剪切位點及cSNP,UTR區域。
普通轉錄組學測序適用于哪些情況?普通轉錄組測序主要適用于兩大類:一是不同的生長階段或者發育過程;二是不同的環境、藥物、病原菌等逆境脅迫處理。轉錄組學測序必須做生物學重復么?需要幾個重復?生物學重復是生物實驗所必須的,轉錄組測序也不例外,至少3次生物學重復。準備生物重復樣品時,通過對實驗的預先設計和控制,盡可能將與實驗處理無關的背景條件控制在同一水平,減少批次效應對結果的影響。轉錄組學測序可以同時測到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?我們通常所講的轉錄組測序只能測到mRNA。但是全轉錄組測序通過構建兩個測序文庫(一是小RNA測序文庫、二是lncRNA測序文庫)是可以測到以上4種RNA的。普通轉錄組測序主要適用于不同的環境、藥物、病原菌等逆境脅迫處理。
轉錄組學的作用:轉錄組測序可以對所有轉錄物進行分類、確定基因的轉錄結構、量化轉錄物的表達水平。蛋白質是生命功能的直接執行者,蛋白組是一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質。整合轉錄組學和蛋白質組學的表達數據對生物樣本進行研究,可以從整體上解釋生物學問題,探究生物體生理和疾病機理等。轉錄組學應用于胃腸瘤發生機制研究:利用轉錄組學可檢測瘤細胞惡化過程中的RNA(編碼RNA及非編碼RNA)的變化,有助于更好地理解胃腸瘤的發生機制。circRNA轉錄組學一類具有閉合環狀結構的非編碼RNA分子。南京全長轉錄學組研究
宏轉錄組學適用范圍包括人體微生態、環境、工業、農業等領域。廣州高通量轉錄組學定性分析
單細胞轉錄組學技術:Anydeplete技術首先通過隨機引物進行一鏈合成,一鏈合成引入核苷酸類似物,用于酶切打斷,二鏈合成同樣引入核苷酸類似物用于保證鏈特異性。然后兩端加上接頭,接頭一條鏈也帶有核苷酸類似物,用于酶切降解。當形成單鏈文庫后,設計特異性引物與rRNA形成文庫結合,一輪退火延伸,rRNA文庫形成雙鏈結構。Reverseadaptor上帶有特異的酶切位點,當形成雙鏈結構酶切位點被識別,切去接頭,這樣rRNA形成的文庫不帶有完整的接頭,而其他文庫帶有完整接頭,通過PCR擴增富積既能得到想要的信息,包含mRNA及LncRNA信息。同樣Anydeplete技術與10×genomics技術一樣,包含分子標簽,可分析duplication及PCR產生突變位點。廣州高通量轉錄組學定性分析