蛋白質組學研究策略:蛋白質組學研究主要分為自底向上(Bottom-Up),自頂向下(Top-Down)和自中向下(Middle-Down)三種策略。“自底向上”策略是指通過分析由蛋白質酶解生成的肽段來鑒定蛋白質。當應用該策略來分析蛋白質組混合物時,因其類似于基因組測序的鳥管法,所以又被稱為鳥管法蛋白質組學(Shotgun Proteomics),該策略依賴于蛋白酶的酶切。“自中向下”策略也依賴于蛋白酶的酶切,但是由于采用了另外的酶,比如OmpT,只能酶切(Lys/Arg-Lys/Arg),因此酶切之后的分子量較大,更利于后續的蛋白組裝環節。蛋白質組具有很高的細胞和組織特異性,不同的細胞組織表達不同的蛋白質組。杭州定量乙酰化蛋白質組學服務
Label Free 非標記定量蛋白質組學技術優點:無需標記,比較大程度的保留樣本的真實性;可以區分“有”、“無”蛋白;不受標簽數量的限制,多個樣本可以同時進行蛋白定量分析;不同物種和不同的樣本類型可以同時開展蛋白定量分析;處理步驟簡單,成本低。 DIA 定量蛋白質組學:數據非依賴性采集(DIA)是一種明顯提升蛋白質組學研究通量和可重復性的技術。經典的 DIA 流程通常依賴于 DDA 譜圖庫的構建,需要消耗大量的樣品,且周期長,成本高。越來越多的不依賴于 DDA 建庫的分析方法相繼誕生。江蘇定量N糖基化蛋白質組學分析方法蛋白質組學可以通過系統性地研究蛋白質表達和翻譯后修飾變化對疾病的影響。
蛋白質組學定義:蛋白質組學(proteomics),指對某一基因組所表達的所有蛋白質及其特征進行大規模、系統化地研究,以期望在蛋白質水平上解釋控制復雜的生命活動的分子網絡。研究的內容主要包括:組成蛋白質一級結構氨基酸的序列特征、蛋白質的豐度、蛋白質活性、蛋白質的修飾、亞細胞定位和三維結構、蛋白質之間的相互作用以及對蛋白質的高階復合物結構。蛋白質組學的研究方法主要有:蛋白質雙向電泳、氨基酸序列測定(包括N端測序和C端測序)、質譜、生物信息學。
蛋白組學常見研究模式主要有兩種:1.通過蛋白質組學尋找疾病發生的發展的新型標志物;2.結合其它組學建立疾病或者研究主題的表達譜和分子機制。蛋白質組學( proteomics) 是指系統研究某一基因組所表達的所有蛋白質,包括組成蛋白質一級結構的氨基酸序列,蛋白質的豐度,蛋白質的修飾以及蛋白質之間的相互作用。蛋白質組和基因組( genome)在概念上有相關性,表示某一個蛋白質組的蛋白質是由基因組所編碼的,然而蛋白質組學和基因組學在研究對象和研究方法上有很大的區別。蛋白質組研究是為了識別及鑒定一個細胞或組織所表達的全部蛋白質以及它們的表達模式。
PRM靶向定量蛋白質組學實驗原理:PRM技術是一種根據已知實測信息或質譜檢測規律的假定信息對樣品中的蛋白質進行靶向定量的技術。該技術主要應用儀器為Q Exactive系列質譜儀,首先以四極桿作為質量過濾器,特異性地選擇與預先設定質荷比相同的肽段離子(母離子)通過,隨后在高能碰撞池中碎裂母離子,之后通過Orbitrap分析碎片離子(子離子)得到肽段的二級質譜信息。四極桿的高選擇性離子過濾與Orbitrap高分辨率測量技術的結合使得PRM技術有很高的特異性,并且有效的降低了背景噪音,去除了干擾離子,提高了靈敏度。定量蛋白質組學是蛋白質組研究的重要內容。杭州定量乙酰化蛋白質組學服務
蛋白質組意指“一種基因組所表達的全套蛋白質”,即包括一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質。杭州定量乙酰化蛋白質組學服務
PRM靶向蛋白質組學:是一種基于Orbitrap為表示的高分辨、高精度質譜的離子監視技術,首先利用四級桿質量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在collisioncell中對母離子進行碎裂,然后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。這樣能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,即可對目標蛋白質/肽段進行相對(一定)定量。從而實現對復雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析。杭州定量乙酰化蛋白質組學服務