蛋白質乙酰化修飾組學定量分析:1. SILAC細胞標記,組織/細胞破碎,提取、提純目的蛋白質(基于SILAC的乙酰化修飾組學定量)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 對多肽片段進行iTRAQ標記(基于iTRAQ的乙酰化修飾組學定量)。4. 使用高效特異性乙酰化抗體對乙酰化修飾肽段進行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對富集的乙酰化肽段進行序列分析。6. 數據分析,比對不同樣本中蛋白乙酰化修飾水平差異,并對產生變化的生物學意義進行解釋。蛋白質翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質的定位。浙江乙酰化修飾蛋白質組學技術服務
翻譯后修飾蛋白組學分析:蛋白質組學的研究的工作不只聚焦于細胞不同生長時期或是疾病條件下的蛋白質表達水平變化,許多至關重要的生命進程不只由蛋白質相對豐度控制,更重要的是被時空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調控,因而揭示翻譯后修飾發生規律是解析蛋白質復雜多樣的生物功能的一個重要前提。蛋白質發生翻譯后修飾時其分子質量會發生響應的改變,通過質譜能夠精確測定蛋白質或多肽的分子質量。同時,發生翻譯后修飾的蛋白質再樣本中含量低且動態范圍廣,所以在質譜檢測前需要對發生修飾的蛋白質或肽段進行富集。上海蛋白質棕櫚酰化修飾組學目前對乙酰化修飾的功能研究主要集中在對細胞轉錄調控,以及對代謝通路的調控這兩個方面。
蛋白質乙酰化修飾組學技術:乙酰化修飾是體內保守的可逆轉的蛋白修飾,對細胞核內轉錄調控因子的刺激有著重要的作用。此外,還存在的非組蛋白乙酰化修飾參與了代謝通路及代謝酶活性的調節。采用肽段預分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙酰化鑒定的影響,再結合免疫共沉淀通過抗體富集乙酰化的肽段,從而實現乙酰化的鑒定及定量。樣品要求:1、SDS-PAGE條帶:5個以上可見考染條帶。2、溶液(目標蛋白質):目標蛋白總量>50μg,目標蛋白濃度>80%。3、溶液(大規模混合蛋白質):蛋白總量>1mg,蛋白濃度>1μg/μl。
蛋白質磷酸化修飾組學:磷酸化蛋白質是由蛋白激酶將ATP或GTP分子上的磷酸基團轉移到底物蛋白特定的氨基酸側鏈上形成的。蛋白質磷酸化是一種可逆的蛋白質翻譯后修飾。在哺乳動物的細胞生命周期中,至少有三分之一的蛋白質發生磷酸化修飾。磷酸化修飾參與許多信號轉導途徑和細胞代謝過程,且許多已知的疾病也與蛋白質的異常磷酸化有關。因此,對磷酸化蛋白質組進行定量研究,尋找差異表達的磷酸化蛋白質,有助于發現疾病的生物標志物和尋找新的具有診療潛力的藥物靶標。在眾多乙酰化修飾的蛋白質中,研究較多的要數細胞核中包圍DNA的組蛋白了。
蛋白質乙酰化修飾的功能:目前對乙酰化修飾的功能研究主要集中在對細胞轉錄調控,以及對代謝通路的調控這兩個方面。在眾多乙酰化修飾的蛋白質中,研究較多的要數細胞核中包圍DNA的組蛋白了。組蛋白和DNA纏繞構成核小體,組蛋白的甲基化、乙酰化修飾能夠調節DNA纏繞的松緊度,從而對基因表達進行調控,因此,組蛋白的翻譯后修飾是表觀遺傳學研究中的重要一環。另外,研究也發現乙酰化修飾普遍存在于人的多種代謝酶之中,并且參與調控代謝通路以及代謝酶的活性。其中在肝臟這樣的代謝中就存在著多種代謝酶被高度乙酰化。蛋白質翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質的活性。浙江乙酰化修飾蛋白質組學技術服務
質譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測。浙江乙酰化修飾蛋白質組學技術服務
質譜分析乙酰化蛋白質組:質譜分析技術可以對蛋白質組中的乙酰化蛋白進行鑒定、乙酰化位點定位以及定量。當質譜用于乙酰化定量蛋白組研究中時,因為乙酰化蛋白質在生物樣本中含量低、動態范圍廣,需要先對乙酰化肽段進行富集,然后再對富集得到的乙酰化肽段樣品進行定量分析。質譜定量乙酰化蛋白組采用肽段預分離降低高豐度蛋白的影響,結合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙酰化的肽段,從而實現大規模乙酰化的鑒定及定量。為了鑒定和定量更多的乙酰化肽段,在酶切過程中還可使用多種不同的酶對蛋白樣品進行酶切。浙江乙酰化修飾蛋白質組學技術服務
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