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浙江靶向轉錄組學

來源: 發布時間:2022-03-20

轉錄組及轉錄組測序(RNA-seq):轉錄組即特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。轉錄組測序(RNA-seq)主要通過高通量測序研究特定組織或細胞在某個時期轉錄出來的mRNA的表達量,進而對相關基因和表型的關系進行分析。本質上講RNA-seq就是在用一種新的方法實現“基因決定性狀”的經典思路。在RNA-seq之前用于研究基因組表達分析的主要技術是基因芯片,不過由于高通量測序成本的下降,RNA-seq的運用愈來愈普遍。轉錄組學狹義上指所有mRNA的組合。浙江靶向轉錄組學

circRNA轉錄組學:是一類具有閉合環狀結構的非編碼RNA分子,沒有5′帽子結構和3′poly(A)結構,主要位于細胞質或儲存于外泌體中,不受RNA外切酶影響,表達更穩定且不易降解,已被證明普遍存在于多種真核生物體內[1]。大多數circRNA是由外顯子環化而成,也有部分circRNA是由內含子環化而成的套索結構。同時由于circRNA含有大量的miRNA應答原件(MREs),能與AGO蛋白形成RNA誘導沉默復合體(RISC)的催化關鍵,然后導致circRNA降解。根據來源,circRNA可大致分為四類:全外顯子型的circRNA,內含子和外顯子組合的EIcircRNA,內含子組成的套索型ciRNA,由病毒RNA基因組、tRNA、rRNA、snRNA等環化產生的circRNA。北京全長轉錄學組研究內容RNA-Seq轉錄組學有著巨大的應用前景。

RNA-Seq轉錄組學的應用:RNA-Seq即對轉錄組進行測序和分析。一般來說在研究所會委托公司測序得到數據自己進行后續的生信分析(質控,mapping,差異基因表達分析,SNV分析等)。RNA-Seq有著巨大的應用前景。在不同背景下比較mRNA水平同一物種,不同組織:研究基因在不同部分的表達情況。同一物種,同一組織:研究基因在不同處理下,不同條件下的表達變化。同一組織,不同物種:研究基因的進化關系。時間序列實驗:基因在不同時期的表達情況與發育的關系。基因分類:找到細胞特異,疾病相關,處理相關的基因表達模式,用于診斷疾病和預測等。基因網絡和通路:基因在細胞活動中的功能,基因間的相互作用。

轉錄組學測序流程:1、樣品RNA準備。2、測序文庫構建。3、DNA成簇(Cluster)擴增。4、高通量測序(Illumina)。5、數據分析。轉錄組的分析大致有以下幾種情況:1、同一物種在發育過程中的各時間節點的基因表達特點及存在的差異;2、不同品系之間存在的差異表達基因;3、不同的外界條件處理,如細菌、病毒、光照、紫外、干旱、高溫、高鹽脅迫,對基因表達的影響;4、同一個體,不同組織之間的基因表達差異。簡而言之,轉錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況。轉錄學組測序能夠提供更高的檢測通量。

普通轉錄組學測序適用于哪些情況?普通轉錄組測序主要適用于兩大類:一是不同的生長階段或者發育過程;二是不同的環境、藥物、病原菌等逆境脅迫處理。轉錄組學測序必須做生物學重復么?需要幾個重復?生物學重復是生物實驗所必須的,轉錄組測序也不例外,至少3次生物學重復。準備生物重復樣品時,通過對實驗的預先設計和控制,盡可能將與實驗處理無關的背景條件控制在同一水平,減少批次效應對結果的影響。轉錄組學測序可以同時測到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?我們通常所講的轉錄組測序只能測到mRNA。但是全轉錄組測序通過構建兩個測序文庫(一是小RNA測序文庫、二是lncRNA測序文庫)是可以測到以上4種RNA的。轉錄組學測序有什么樣的樣品要求?浙江靶向轉錄組學

轉錄組學可以直接測定每個轉錄本單核苷酸分辨率的準確度。浙江靶向轉錄組學

轉錄組學測序比其他研究方法有哪些優勢?轉錄組學測序具有以下優勢:(1)可以直接測定每個轉錄本片段序列、單核苷酸分辨率的準確度,同時不存在傳統微陣列雜交的熒光模擬信號帶來的交叉反應和背景噪音問題;(2)靈敏度高,可以檢測細胞中少至幾個拷貝的稀有轉錄本;(3)可以對任意物種進行全基因組分析,無需預先設計特異性探針,因此無需了解物種基因信息,能夠直接對任何物種進行轉錄組分析,同時能夠檢測未知基因,發現新的轉錄本,并準確地識別可變剪切位點及cSNP,UTR區域。(4)檢測范圍廣,高于6個數量級的動態檢測范圍,能夠同時鑒定和定量稀有轉錄本和正常轉錄本。浙江靶向轉錄組學

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