蛋白質組學技術:飛行時間質譜:MALDI的基本原理是將分析物分散在基質分子(尼古丁酸及其同系物)中并形成晶體,當用激光(337nm的氮激光)照射晶體時,基質分子吸收激光能量,樣品解吸附,基質-樣品之間發生電荷轉移使樣品分子電離。它從固相標本中產生離子,并在飛行管中測定其分子量,MALDI-TOF-MS一般用于肽質量指紋圖譜,非常快速(每次分析只需3~5min),靈敏(達到fmol水平),可以精確測量肽段質量,但是如果在分析前不修飾肽段,MALDI-TOF-MS不能給出肽片段的序列。蛋白質組意指“一種基因組所表達的全套蛋白質”,即包括一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質。貴州高通量蛋白質組學報價
蛋白組學技術:質譜技術相較于傳統蛋白質鑒定技術而言,擁有靈敏、準確、高通量、自動化等特點。質譜鑒定蛋白質的基本原理是先將樣品分子離子化,然后根據不同離子之間的質荷比差異來分離并確定蛋白質的相對分子質量。根據蛋白質酶解后所得到的肽質量指紋圖譜、肽序列標簽、和肽階梯序列去檢索蛋白質或核酸序列數據庫,質譜技術可達到對蛋白質的快速鑒定和高通量篩選。因產生離子的方法不同而發展起來的質譜包括基質輔助激光解吸離子化質譜、電噴霧離子化質譜、表面增強激光解吸離子化質譜等。哈爾濱高通量蛋白質組學分析研究蛋白質組學研究不僅是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業帶來巨大的利益。
定量蛋白質組學分析:特點:(1)不同樣本標記之后混樣,統一處理上機,減少了分別上機造成的實驗誤差,并利用同位素標簽的豐度來檢測,定量更準確,重復性更好;(2)由于需要標記試劑標記,因此成本相對較高;(3)通量高,在一次實驗中比較多可同時比較8個樣品;(4)利用基于同一個參考樣品的辦法,可以進行多于8個樣品的定量比較;(5)iTRAQ的覆蓋度高、靈敏度高。Label-Free定量蛋白質組學分析:Label-Free定量,即非標記的定量蛋白質組學,不需要對比較樣本做特定標記處理,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質譜響應信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化,通常用于分析大規模蛋白鑒定和定量時所產生的質譜數據。
定量蛋白質組學的方法學背景和意義:從生命活動的直接執行者——蛋白質的角度研究生命現象和規律(特別是疾病防治和病理研究)已成為研究生命科學的主要手段。而這些研究往往離不開對細胞、組織中含有蛋白質種類和表達量的研究。對處不同時期、不同條件下蛋白質表達水平變化的研究,識別功能模塊和路徑,監控疾病的生物標志物,這些研究都需要對蛋白質進行鑒定和定量。生物質譜技術的出現和不斷成熟為蛋白質差異表達分析提供了更可靠、動態范圍更廣的研究手段。基于質譜技術,科學家們不斷開發出新的定量蛋白質組學方法,來了解細胞、組織或生物體的整體蛋白質動力學。定量蛋白質組學是蛋白質組研究的重要內容。
蛋白質組學在生物學領域的研究中的應用是怎樣的?研究對象涉及到生物體且生物體內表達蛋白,理論上都可以應用蛋白質組學。蛋白質組學是以研究生物體蛋白組成及其變化規律為目的的應用科學。主要使用的儀器為液質聯用高分辨率質譜儀。詳細來說,蛋白質組學包含許多分支:非標定量蛋白質組學(定性研究生物體的蛋白組成),定量蛋白質組學(對生物體蛋白表達含量進行測定),修飾蛋白質組學(對蛋白質翻譯后修飾進行檢測)及相互作用蛋白質組研究(蛋白質直接相互作用機制解析)等。蛋白質組學屬于后基因組時代的科學研究,針對基因表達產物進行檢測與定量。因此更能反應出生物體生理條件下的水平與狀態。蛋白質組研究技術涉及到各種重要的生物學現象,如信號轉導、細胞分化、蛋白質折疊等等。哈爾濱醫學蛋白質組學一般流程
蛋白質組學與其它學科的交叉也將日益明顯和重要。貴州高通量蛋白質組學報價
常規蛋白質組學:Labelfree多肽組學:顧名思義,就是不使用任何標記方法,直接對肽段進行質譜鑒定和定性定量分析。實驗流程簡單,只需要對蛋白進行常規酶解和除鹽步驟即可上機。定量方式分為兩種:峰面積(Peakintensity)和峰計數(Spectralcount),常用的是峰面積。不過,由于質譜采集時只選取topN的母離子進行二級碎裂和MS2檢測,所以會丟失一些豐度較低的肽段信息,缺失值比較多。TMT/iTRAQ標記定量蛋白組學:TMT全稱是TandemMassTag,是經典化學標記試劑,普遍用于差異表達蛋白質組分析研究中。該技術采用6重、10重或16重同位素標簽,與肽段的氨基發生共價結合反應,可實現同時對6個/10個/16個不同樣品中蛋白質的定性和定量分析。(目前16標鹿明生物可提供技術服務)。貴州高通量蛋白質組學報價
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