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哈爾濱IncRNA轉錄組學應用

來源: 發布時間:2022-03-16

轉錄組是特定發育階段或生理條件下細胞內的完整轉錄信息的匯合,表示了基因表達的中間狀態。轉錄組測序可以對所有轉錄物進行分類、確定基因的轉錄結構、量化轉錄物的表達水平。蛋白質是生命功能的直接執行者,蛋白組是一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質。整合轉錄組學和蛋白質組學的表達數據對生物樣本進行研究,可以從整體上解釋生物學問題,探究生物體生理和疾病機理等。轉錄組學應用于胃腸瘤發生機制研究:利用轉錄組學可檢測瘤細胞惡化過程中的RNA(編碼RNA及非編碼RNA)的變化,有助于更好地理解胃腸瘤的發生機制。轉錄組學是研究細胞表型和功能的一個重要手段。哈爾濱IncRNA轉錄組學應用

circRNA轉錄組學生物學功能:circRNA主要存在于細胞質或外泌體中,具有組織特異性、疾病特異性、時序特異性及高穩定性等特征。近幾年,大量的研究表明circRNA在生物的生長發育、脅迫應答、疾病發生和發展等方面密切相關,并預測其在疾病診斷標記物等方面的應用前景,但其生物學功能在很大程度上仍然未知。目前認可度比較高的circRNA生物學功能。miRNAsponge。circRNA富含miRNA結合位點來充當miRNA海綿作用,阻止miRNA在3′非翻譯區與mRNA相互作用,進而間接調控miRNA下游靶基因的表達。上海靶向轉錄組學領域轉錄組學可以準確地識別可變剪切和融合基因。

單細胞轉錄組學基本概念:普通轉錄組的思路也可以應用到單細胞轉錄組。普通轉錄組相當于把一群細胞混合到一起去提取RNA,獲得的是每個細胞中RNA表達量的平均值。單細胞是把每個細胞單獨分出來去提取RNA,然后建庫測序,獲得是是單個細胞的表達值。在每個細胞里面基因的表達具有隨機性,且存在異質性。而且這些細胞群中會存在不同類型的細胞,尤其是當我們對整個組織進行測序時,它們本身就是由不同類型的細胞組成的,而我們用普通轉錄組來測序,相當于掩蓋住了這些不同的細胞類型的差異,展示的是整個組織的平均的狀態,所以說單細胞從這個來看跟普通轉錄組就不同在是用一個細胞測,不是用一堆細胞測。

RNA-Seq,是基于新一代測序技術的轉錄組學研究方法:首先提取生物樣品的全部轉錄的RNA并進行mRNA富集,然后反轉錄為cDNA后進行的新一代高通量測序,在此基礎上進行片段的拼接組裝,從而可得到一個個的轉錄本,進而可以形成對該生物樣品當前發育狀態的基因表達狀況的全局了解。不同階段或部位的生物樣品的RNA-Seq轉錄組進行比較分析,則可以在轉錄層面得到基因表達水平的變化,針對關鍵基因則可以進行代謝通路(Pathway)的構建。轉錄組學即特定細胞在某一功能狀態下轉錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。轉錄組學測序樣品純度要求,OD值應在1.8至2.2之間。

宏轉錄學組概念:宏轉錄組測序是對某一特定時期、特定環境樣品中的全部微生物的RNA進行高通量測序,直接獲得該環境中所有微生物轉錄組信息的一種測序技術的新應用。宏轉錄組中不只包含有微生物的物種信息,還有微生物的基因表達信息。如果說宏基因組能告訴我們微生物群,那么宏轉錄組則能告訴我們這些微生物,這有助于挖掘微生物功能基因和探索微生物與環境、疾病、動植物等關系的機制。宏轉錄組分析:從以G為單位的高通量測序數據中獲取研究所需的微生物種類、基因、通路等信息是進行宏轉錄組研究必須經歷的一步。現在網絡上分析組學數據的工具五花八門。能否從眾多組學工具中選擇出適合分析宏轉錄組數據的軟件,能否搭建一套完整、快速、高效、靈敏、高精確的宏轉錄組分析pipline,直接關乎到后期數據分析的進行。相對于傳統的芯片雜交平臺,轉錄學組測序無需預先針對已知序列設計探針。河南靶向轉錄組學定性分析

轉錄組學檢測范圍廣,高于6個數量級的動態檢測范圍。哈爾濱IncRNA轉錄組學應用

單細胞轉錄組學技術:10×genomics技術:首先在凝膠微珠上種上特定的DNA的片段,DNA的片段由三部分組成:Barcode、UMI、PolyT組成。Barcode是16個堿基的長度。一共有400萬種Barcode,一個微珠是對應于一種Barcode,通過這400萬種Barcode,可以把凝膠微珠給區分開(通過barcode可以把cell分開)。UMI是一段隨機序列,也就是說每一個DNA分子,都有自己的UMI序列(一個微珠上有很多種UMI,通過UMI可以把RNA分子分開,并可以標記RNA分子的數量)。10個堿基長的UMI,有100萬種序列的變化(4^10=1,048,576),UMI的作用是為了區分哪些reads是來自于一個原始cDNA分子區分基因片段重復還是duplication及區分是真實的SNP位點還是PCR產生的突變。通過10×genomics儀器將單個細胞與單個凝膠微珠通過油相混在一起,形成油包水的小微滴。哈爾濱IncRNA轉錄組學應用

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