蛋白質磷酸化修飾鑒定方法: Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳:Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳通過連接在丙烯酰胺分子上的雙核金屬(如Mn2+)配合物對磷酸基團的親和,造成磷酸化蛋白遷移的滯留,再將電泳結果轉移到PVDF膜上,用相應蛋白的抗體識別,根據遷移滯留檢測蛋白磷酸化。技術優勢特點:1、無放射危害。2、鑒定不受限于特異性識別蛋白質磷酸化的抗體。3、適用于大規模磷酸化蛋白分析。4、與質譜鑒定兼容,進行更為精細的分析鑒定。蛋白質翻譯后修飾有什么生物學意義?河南磷酸化修飾蛋白質組學研究
質譜分析蛋白翻譯后修飾:相對于蛋白質印跡等技術,質譜技術能更有效的對蛋白質的翻譯后修飾進行分析,且可以對常規的Western blot 翻譯后修飾蛋白鑒定進行補充。質譜分析蛋白翻譯后修飾一般使用自下而上的基于肽段的方法。但是自下而上的質譜方法無法保證可以完全識別目的蛋白的特定翻譯后修飾,因為質譜是通過蛋白質序列內的多個肽段來鑒定的,這很大程度上降低了翻譯后修飾肽段被識別的機會。一種提高質譜儀檢測到修飾肽段數量的策略是使用PTM親和試劑進行肽段富集,而不是使用PTM親和試劑進行蛋白富集,這將減少富集的未修飾肽段的數量。哈爾濱蛋白質丙酰化修飾組學價格蛋白質翻譯后修飾組學磷酸化修飾具有可逆的特性。
蛋白質修飾位點分析:基于LC-MS/MS分析能夠精確測定蛋白質或多肽分子質量這一特性,從而檢測蛋白質或者多肽上位點發生何種修飾。可檢測修飾類型如下: 磷酸化、糖基化、乙酰化、泛素化、丙酰化、丁酰化、丙二酰化、戊二酰化、琥珀酰化、單甲基化、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化:信號轉導、細胞周期、生長發育機理等;2、糖基化:蛋白質折疊、更新以及免疫應答等;3、乙酰化:基因表達調控、細胞凋亡、細胞代謝、蛋白質穩定性以及神經退行性的病變等;4、泛素化:細胞周期、細胞凋亡、轉錄調控、DNA修復以及信號轉導等;5、甲基化:染色質結構及轉錄調控等;6、丙酰化 / 丙二酰化 / 戊二酰化 / 琥珀酰化:主要存在于線粒體和細菌中,與代謝過程密切相關。
翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質翻譯后修飾是影響蛋白質功能并調節整個細胞過程的重要方式,幾乎在每個細胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質對揭示蛋白質的功能和深入了解各種生理現象具有重要意義。大多數翻譯后修飾蛋白以低化學計量和豐度存在,這限制了在分析全細胞裂解液時對其的檢測。因此,要在蛋白質組學的范圍內表征翻譯后修飾蛋白,純化方法是必要的,以分離修飾蛋白和肽段,然后再進行后續分析。后續分析一般采用質譜技術進行,可以對翻譯后修飾蛋白組進行定性和定量研究。乙酰化修飾對細胞核內轉錄調控因子的刺激有著非常重要的作用。
蛋白質翻譯后修飾有什么生物學意義?可以使蛋白質具有生物活性,可以發揮相應的功能。翻譯是蛋白質生物合成(基因表達中的一部分,基因表達還包括轉錄)過程中的第二步(轉錄為第1步),翻譯是根據遺傳密碼的中心法則,將成熟的信使RNA分子(由DNA通過轉錄而生成)中“堿基的排列順序”(核苷酸序列)解碼,并生成對應的特定氨基酸序列的過程。但也有許多轉錄生成的RNA,如轉運RNA(tRNA)、核糖體RNA(rRNA)和小核RNA(snRNA)等并不被翻譯為氨基酸序列。常見的蛋白質翻譯后修飾包括糖基化。北京糖基化修飾蛋白質組學主要技術
在早期的研究中,乙酰化修飾一直被認為是真核細胞所特有的一種翻譯后修飾。河南磷酸化修飾蛋白質組學研究
蛋白翻譯后修飾檢測:由于PTMs在基礎生物學以及疾病發病機理中的重要性,因此非常需要對蛋白質的翻譯后修飾進行檢測。對蛋白翻譯后修飾進行研究時通常需要富集步驟,因為這些翻譯后修飾的蛋白質相對含量較低。大多數PTMs的檢測方法與富集策略結合在一起開發,以提供比較好的機會來識別、驗證和研究蛋白翻譯后修飾的功能。但是,在檢測已有特異性翻譯后修飾抗體的修飾蛋白質時,可能不需要富集步驟。質譜技術,通過測定肽段的分子量可以對該肽段的翻譯后修飾情況進行檢測,并可以對翻譯后修飾蛋白進行定性和定量分析。河南磷酸化修飾蛋白質組學研究
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