蛋白翻譯后修飾組學技術在準確醫學中的應用:盡管目前大數據的獲得會采用基因組學和轉錄組學,但是關鍵的發現還是依賴蛋白質組數據而得到的。近來越來越多的研究表明蛋白組學驅動的準確的醫學具有極大的實用性和普適性,蛋白組學的研究更加速了臨床轉化的進程。蛋白翻譯后修飾(post-ranslational modification, PTM)賦予了蛋白種類的豐富性及蛋白功能的多樣化,研究蛋白翻譯后修飾不只可以確定蛋白修飾(磷酸化、泛素化、酰化、甲基化、SUMO化等)或蛋白酶裂解的新位點,還可以發現生物標記物及探索藥物/化學調節物的作用機制。蛋白質磷酸化修飾組學具有全方面性。廣東蛋白質亞硝基化修飾組學領域
翻譯后修飾蛋白組學分析:蛋白質組學的研究的工作不只聚焦于細胞不同生長時期或是疾病條件下的蛋白質表達水平變化,許多至關重要的生命進程不只由蛋白質相對豐度控制,更重要的是被時空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調控,因而揭示翻譯后修飾發生規律是解析蛋白質復雜多樣的生物功能的一個重要前提。蛋白質發生翻譯后修飾時其分子質量會發生響應的改變,通過質譜能夠精確測定蛋白質或多肽的分子質量。同時,發生翻譯后修飾的蛋白質再樣本中含量低且動態范圍廣,所以在質譜檢測前需要對發生修飾的蛋白質或肽段進行富集。貴陽甲基化修飾蛋白質組學質譜分析質譜是蛋白質翻譯后修飾檢測的常用技術之一。
蛋白質磷酸化修飾類型:根據磷酸氨基酸殘基的不同,可將磷酸化蛋白質分為4類,即O-磷酸鹽蛋白質、N-磷酸鹽蛋白質、酰基磷酸鹽蛋白質和S-磷酸鹽蛋白質。1、O-磷酸鹽蛋白質通過羥氨基酸(如絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸)的磷酸化形成。2、 N-磷酸鹽蛋白質通過精氨酸、賴氨酸或組氨酸的磷酸化形成。3、 酰基磷酸鹽蛋白質通過天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸鹽蛋白質通過半胱氨酸磷酸化形成。蛋白質磷酸化修飾鑒定方法:免疫印跡技術是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的、根據特定抗原-抗體的特異性反應來檢測復雜樣品中的某種蛋白質的免疫生化分析方法。
蛋白質乙酰化修飾鑒定流程:1. 組織/細胞破碎,提取、提純目的蛋白質。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特異性乙酰化抗體對乙酰化修飾肽段進行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS對富集的乙酰化肽段進行鑒定分析。5. 數據分析,并對鑒定的乙酰化位點的生物學功能進行解釋預測。隨著蛋白質組研究的發展,我們越來越深刻地意識到,對于生物體生命活動的管理和調控過程,密切相關的不只是單個蛋白質層面的修飾狀態,更重要的是研究蛋白質組學水平研究在翻譯后修飾的動態變化。高質、高效的蛋白質翻譯后修飾富集技術和豐富的、準確的定量手段使得研究蛋白質水平的翻譯后修飾組學成為現實,借助這些組學研究手段能夠實現不同生理病理狀態下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較,深入地揭示翻譯后修飾水平的波動與生物生命活動的密切聯系。蛋白質翻譯后修飾組學磷酸化修飾具有簡單的特性。
蛋白質磷酸化修飾組學:磷酸化蛋白質是由蛋白激酶將ATP或GTP分子上的磷酸基團轉移到底物蛋白特定的氨基酸側鏈上形成的。蛋白質磷酸化是一種可逆的蛋白質翻譯后修飾。在哺乳動物的細胞生命周期中,至少有三分之一的蛋白質發生磷酸化修飾。磷酸化修飾參與許多信號轉導途徑和細胞代謝過程,且許多已知的疾病也與蛋白質的異常磷酸化有關。因此,對磷酸化蛋白質組進行定量研究,尋找差異表達的磷酸化蛋白質,有助于發現疾病的生物標志物和尋找新的具有診療潛力的藥物靶標。蛋白質乙酰化修飾組學技術對細胞核內轉錄調控因子的刺激有著重要的作用。廣東蛋白質亞硝基化修飾組學領域
乙酰化修飾是體內高度保守的可逆轉的蛋白修飾。廣東蛋白質亞硝基化修飾組學領域
蛋白質翻譯后修飾:蛋白質的翻譯后修飾通過可逆的共價鍵將小分子或蛋白質與底物蛋白質上特定的氨基酸結合,調控著底物的酶活性、功能以及三級結構的變化。各種蛋白質翻譯后修飾在信號通路和網絡中發揮著重要的作用,翻譯后修飾系統的紊亂將導致一系列疾病的發生。通過實驗的方法鑒定蛋白質翻譯后修飾的位點需要耗費大量的資金和時間,并且酶反應的優化常常難以實現。而計算的方法則能夠快速、準確的預測酶特異性的底物蛋白質及其修飾位點。廣東蛋白質亞硝基化修飾組學領域
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