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南京轉錄組學分析研究

來源: 發(fā)布時間:2022-02-17

單細胞轉錄組關鍵步驟:單細胞的分離和捕獲:溫和分離,稀有細胞。轉錄本的捕獲和擴增:RNA測序需要0.1-1.0ugtotalRNA,捕獲效率10%(5-**NA測序需要1ngDNA,極限稀釋加移液分離單細胞;顯微操作分選單細胞;流式分選帶有表面Marker的單細胞;激光切割實體組織;微流控技術;磁珠捕獲,主要用于CTC。它的一個優(yōu)點是可以結合流式細胞熒光分選(FACS,fluorescentactivatedcellsorting)根據(jù)表面Marker分選細胞。因此特別適合分選細胞子集用于測序。它的另一個優(yōu)點是可以獲得細胞形態(tài)全覽圖,提供另外一個維度的信息,可用于鑒定微孔中是否有損傷的細胞或雙份細胞,主要缺點是通量低且每個細胞所需的工作量相當大。轉錄組學可應用于炎癥發(fā)生機制的發(fā)現(xiàn)及干預。南京轉錄組學分析研究

什么是轉錄組學測序?轉錄組廣義上指在某一生理條件下,細胞內所有轉錄組產物的組合,包括:mRNA、ncRNA、rRNA等;狹義上指所有mRNA的組合。轉錄組測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態(tài)下所能轉錄出來的所有RNA的總和,主要包括mRNA和ncRNA。轉錄組具有時間特異性、組織特異性、空間特異性等特點。無參轉錄組和有參轉錄組的區(qū)別?如果所研究的物種有組裝注釋質量較好基因組序列,且和該基因組序列比對效率較高,那么可以采用有參轉錄組的分析策略,直接進行分析。反之,則需要按照無參轉錄組的分析策略進行轉錄本組裝,構建unigene庫,然后進行后續(xù)分析。南京轉錄組學分析研究轉錄組學檢測范圍廣,高于6個數(shù)量級的動態(tài)檢測范圍。

轉錄組學(transcriptomics)是功能基因組學(FunctionalGenomics)研究的重要組成部分,是一門在整體水平上研究細胞中所有基因轉錄及轉錄調控規(guī)律的學科。隨著人類基因組計劃HGP(HumanGenomeProject)的完成,科學家也逐漸認識到對基因結構序列的研究只是基因組學研究的一部分,并不能揭示所有的生命奧秘,所以接下來需要解決的問題是:研究這些基因序列的功能、參與的生命過程、表達調控方式,以及這些基因在不同的時空條件下的表達差異等。這些問題都需要功能基因組學技術來解決,而轉錄組學技術是功能基因組學研究的重要組成部分。對基因及其轉錄表達產物功能研究的功能基因組學,將為疾病控制和新藥開發(fā)、作物和畜禽品種的改良提供新思路,為人類解決健康問題、食物問題、能源問題和環(huán)境問題提供新方法。

轉錄組學研究的方法:在早期,由于測序價格昂貴、基因序列數(shù)目有限,轉錄組學研究者只能進行極少數(shù)特定基因的結構功能分析和表達研究。近十幾年,分子生物學技術的快速發(fā)展使高通量分析成為可能,這為真正意義上的轉錄組學的研究奠定了基礎。這些高通量研究方法主要可以分為兩類:一類是基于這類方法包括表達序列標簽技術、基因表達系列分析技術、大規(guī)模平行測序技術、RNA測序技術其中,Microarray和EST技術是較早發(fā)展起來的先驅技術,SAGE、MPSS和RNA-sea是高通量測序條件下的轉錄組學研究方法轉錄組學研究有助于了解特定生命過程中相關基因的整體表達情況,進而從轉錄水平初步揭示該生命過程的代謝網絡及其調控機理。轉錄組學測序可以同時測到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?

RNA-Seq轉錄組學技術優(yōu)勢:RNA-seq技術可以檢測到低水平表達、未識別的轉錄子和新拼接亞型基因。另一方面,與基因芯片相比,RNA-Seq有一個更廣的檢測動態(tài)范圍,可以研究編碼和非編碼RNA,更易于基因網絡的構建、發(fā)現(xiàn)選擇性剪切轉錄物,檢測到等位基因的具體表達方式,也可以用來提取基因型信息。在RNA-Seq單細胞研究中,一個主要優(yōu)勢是可以分析整個轉錄序列,而不是有限制數(shù)量的基因,并且,研究DNA和RNA的方法并不是相互排斥的,他們可以相互結合使用,產生更多的生物學上重要的信息。RNA-Seq轉錄組學有著巨大的應用前景。哈爾濱高通量轉錄組學定量分析

轉錄組學有高通量、更精確的數(shù)字信號。南京轉錄組學分析研究

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