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湖北蛋白質泛素化修飾組學鑒定

來源: 發布時間:2022-02-15

什么是蛋白質的翻譯后修飾?蛋白質的翻譯后修飾()是指蛋白質在翻譯后的化學修飾。對于大部分的蛋白質來說,這是蛋白質生物合成的較后步驟。PTM是細胞信號傳導中的重要組成部分。通過向修飾基團添加一個或多個氨基酸殘基或通過蛋白質水解切割該基團來改變蛋白質的性質,是蛋白質生物學功能表達的重要步驟。生物蛋白質的翻譯后修飾極大地增加了蛋白質結構的類型和功能。這個過程調節細胞周期和蛋白質轉錄,并影響表觀遺傳學。蛋白質糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質上的過程。湖北蛋白質泛素化修飾組學鑒定

蛋白質乙?;揎椊M學定量分析:1. SILAC細胞標記,組織/細胞破碎,提取、提純目的蛋白質(基于SILAC的乙?;揎椊M學定量)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 對多肽片段進行iTRAQ標記(基于iTRAQ的乙?;揎椊M學定量)。4. 使用高效特異性乙?;贵w對乙?;揎楇亩芜M行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對富集的乙?;亩芜M行序列分析。6. 數據分析,比對不同樣本中蛋白乙酰化修飾水平差異,并對產生變化的生物學意義進行解釋。湖北蛋白質泛素化修飾組學鑒定蛋白質的磷酸化修飾是生物體內重要的共價修飾方式之一。

翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質翻譯后修飾是影響蛋白質功能并調節整個細胞過程的重要方式,幾乎在每個細胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質對揭示蛋白質的功能和深入了解各種生理現象具有重要意義。大多數翻譯后修飾蛋白以低化學計量和豐度存在,這限制了在分析全細胞裂解液時對其的檢測。因此,要在蛋白質組學的范圍內表征翻譯后修飾蛋白,純化方法是必要的,以分離修飾蛋白和肽段,然后再進行后續分析。后續分析一般采用質譜技術進行,可以對翻譯后修飾蛋白組進行定性和定量研究。

蛋白質乙酰化修飾定義:蛋白質在細胞中經過翻譯后,到被運輸到相應的細胞器并且發生特定的生物學作用前會經過很重要的一步加工,那就是蛋白質翻譯后修飾加工。蛋白質翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質的活性、定位或功能。通過蛋白質翻譯后修飾也進一步增加了細胞通路機制和生命活動的多樣性和復雜性。常見的蛋白質翻譯后修飾包括磷酸化,乙?;腔?,泛素化等。蛋白質乙?;揎?,顧名思義指的就是在蛋白質原有基礎上面嫁接上乙酰化基團。在細胞中,乙?;揎椀姆磻梢阴;D移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙?;D移并添加在蛋白質賴氨酸殘基上。在早期的研究中,乙?;揎椧恢北徽J為是真核細胞所特有的一種翻譯后修飾,直到后來研究發現原核細胞中年也存在著蛋白質乙?;揎?。所以,乙?;揎検窃撕驼婧松锼灿械囊环N翻譯后修飾類型。蛋白質翻譯后修飾組學磷酸化修飾具有靈活的特性。

蛋白質磷酸化修飾組學技術:蛋白質的磷酸化修飾是生物體內重要的共價修飾方式之一。磷酸化修飾本身所具有的簡單、靈活、可逆的特性,以及磷酸基團的供體ATP的易得性,使得磷酸化修飾被真核細胞所選擇接受成為一種普遍的調控手段。蛋白質的磷酸化和去磷酸化這一可逆過程,幾乎調節著包括細胞的增殖、發育、分化、細胞骨架調控、細胞凋亡、神經活動、肌肉收縮、新陳代謝發生等生命活動的過程,并且可逆的蛋白質磷酸化是目前所知道的主要的信號轉導方式。目前已經知道有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起,而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導致的后果。在早期的研究中,乙?;揎椧恢北徽J為是真核細胞所特有的一種翻譯后修飾。湖北蛋白質泛素化修飾組學鑒定

在眾多乙?;揎椀牡鞍踪|中,研究較多的要數細胞核中包圍DNA的組蛋白了。湖北蛋白質泛素化修飾組學鑒定

蛋白質有哪些翻譯后修飾?作用機制和生物學功能是什么?前體蛋白是沒有活性的,常常要進行一個系列的翻譯后加工,才能成為具有功能的成熟蛋白。加工的類型是多種多樣的,一般分為以下幾種:N-端fMet或Met的切除、二硫鍵的形成、化學修飾和剪切。當合成蛋白質時,20種不同的氨基酸會組合成為蛋白質。蛋白質的翻譯后蛋白質其他的生物化學官能團(如醋酸鹽、磷酸鹽、不同的脂類及碳水化合物)會附在蛋白質上從而改變蛋白質的化學性質,或是造成結構的改變(如建立雙硫鍵),來擴闊蛋白質的功能。再者,酶可以從蛋白質的N末端移除氨基酸,或從中間將肽鏈剪開。舉例來說,胰島素它會在建立雙硫鍵后被剪開兩次,并在鏈的中間移走多肽前體,而形成的蛋白質包含了兩條以雙硫鍵連接的多肽鏈。湖北蛋白質泛素化修飾組學鑒定

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