蛋白質磷酸化修飾類型:根據磷酸氨基酸殘基的不同,可將磷酸化蛋白質分為4類,即O-磷酸鹽蛋白質、N-磷酸鹽蛋白質、酰基磷酸鹽蛋白質和S-磷酸鹽蛋白質。1、O-磷酸鹽蛋白質通過羥氨基酸(如絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸)的磷酸化形成。2、 N-磷酸鹽蛋白質通過精氨酸、賴氨酸或組氨酸的磷酸化形成。3、 酰基磷酸鹽蛋白質通過天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸鹽蛋白質通過半胱氨酸磷酸化形成。蛋白質磷酸化修飾鑒定方法:免疫印跡技術是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的、根據特定抗原-抗體的特異性反應來檢測復雜樣品中的某種蛋白質的免疫生化分析方法。乙酰化修飾是體內高度保守的可逆轉的蛋白修飾。浙江磷酸化修飾蛋白質組學服務
翻譯后修飾蛋白組學分析:在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質譜進行分析。通過質譜分析,得到的是一系列肽段的分子質量信息。對于某一個特定肽段而言,在沒有發生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。當它發生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的。在質譜檢測過程中發現其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個磷酸根的分子量,假設這個肽段就發生了磷酸化修飾,再通過二級質譜圖進行二次確認。南京糖基化修飾蛋白質組學價格蛋白質修飾可檢測修飾類型有磷酸化、糖基化、乙酰化、泛素化、丙酰化、丁酰化、丙二酰化。
蛋白質翻譯后修飾組學:蛋白質翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對翻譯后的蛋白質進行共價加工的過程。它通過在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團,可以改變蛋白質的物理、化學性質,進而影響蛋白質的空間構象和活性狀態、亞細胞定位、折疊及其穩定性以及蛋白質-蛋白質相互作用。蛋白質翻譯后修飾的豐度變化在生命活動研究中具有重大意義,異常的翻譯后修飾會導致多種疾病的發生。質譜可以分辨蛋白質修飾前和修飾后分子量上的變化,因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對翻譯后修飾方式進行鑒定和定量。
蛋白質磷酸化修飾鑒定方法:免疫印跡技術:技術優勢特點。1、 檢測特異性高。2、能夠特異鑒定單個磷酸化位點。同位素標記(Isotope Labeled)結合免疫印跡法:此方法的原理是當蛋白發生磷酸化時,放射性32P的摻入和分子質量變化引起的凝膠遷移(gelshift),再通過免疫印跡方法檢測同位素標記,從而達到鑒定磷酸化蛋白的目的。技術優勢特點:1、檢測技術靈敏并且直觀。2、常用于體外磷酸化反應結果檢測。3、 磷酸化鑒定不受抗體限制。4、可同時分析多個蛋白磷酸化。蛋白質磷酸化修飾鑒定方法有免疫印跡技術。
蛋白質乙酰化修飾定義:蛋白質在細胞中經過翻譯后,到被運輸到相應的細胞器并且發生特定的生物學作用前會經過很重要的一步加工,那就是蛋白質翻譯后修飾加工。蛋白質翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質的活性、定位或功能。通過蛋白質翻譯后修飾也進一步增加了細胞通路機制和生命活動的多樣性和復雜性。常見的蛋白質翻譯后修飾包括磷酸化,乙酰化,糖基化,泛素化等。蛋白質乙酰化修飾,顧名思義指的就是在蛋白質原有基礎上面嫁接上乙酰化基團。在細胞中,乙酰化修飾的反應由乙酰基轉移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙酰基轉移并添加在蛋白質賴氨酸殘基上。在早期的研究中,乙酰化修飾一直被認為是真核細胞所特有的一種翻譯后修飾,直到后來研究發現原核細胞中年也存在著蛋白質乙酰化修飾。所以,乙酰化修飾是原核和真核生物所共有的一種翻譯后修飾類型。質譜是蛋白質翻譯后修飾檢測的常用技術之一。上海蛋白質翻譯后修飾組學研究
蛋白質翻譯后修飾在蛋白質中磷酸化位點分析時應該注意些什么問題?浙江磷酸化修飾蛋白質組學服務
蛋白質修飾位點分析:基于LC-MS/MS分析能夠精確測定蛋白質或多肽分子質量這一特性,從而檢測蛋白質或者多肽上位點發生何種修飾。可檢測修飾類型如下: 磷酸化、糖基化、乙酰化、泛素化、丙酰化、丁酰化、丙二酰化、戊二酰化、琥珀酰化、單甲基化、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化:信號轉導、細胞周期、生長發育機理等;2、糖基化:蛋白質折疊、更新以及免疫應答等;3、乙酰化:基因表達調控、細胞凋亡、細胞代謝、蛋白質穩定性以及神經退行性的病變等;4、泛素化:細胞周期、細胞凋亡、轉錄調控、DNA修復以及信號轉導等;5、甲基化:染色質結構及轉錄調控等;6、丙酰化 / 丙二酰化 / 戊二酰化 / 琥珀酰化:主要存在于線粒體和細菌中,與代謝過程密切相關。浙江磷酸化修飾蛋白質組學服務
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