單細胞轉錄組學基本概念：普通轉錄組的思路也可以應用到單細胞轉錄組。普通轉錄組相當于把一群細胞混合到一起去提取RNA，獲得的是每個細胞中RNA表達量的平均值。單細胞是把每個細胞單獨分出來去提取RNA，然后建庫測序，獲得是是單個細胞的表達值。在每個細胞里面基因的表達具有隨機性，且存在異質性。而且這些細胞群中會存在不同類型的細胞，尤其是當我們對整個組織進行測序時，它們本身就是由不同類型的細胞組成的，而我們用普通轉錄組來測序，相當于掩蓋住了這些不同的細胞類型的差異，展示的是整個組織的平均的狀態，所以說單細胞從這個來看跟普通轉錄組就不同在是用一個細胞測，不是用一堆細胞測。轉錄組學能夠同時鑒定和定量稀有轉錄本和正常轉錄本。武漢高通量轉錄組學技術服務

轉錄組學測序有什么樣的樣品要求？（1）樣品純度要求：OD值應在1.8至2.2之間；電泳檢測28S:18S至少大于1.8。（2）樣品濃度：totalRNA濃度不低于400ng/μg。（3）totalRNA樣品請置于-20℃保存；請提供totalRNA樣品具體濃度、體積、制備時間、溶劑名稱及物種來源。請同時附上QC數據，包括電泳膠圖、分光光度或Nanodrop儀器檢測數據。（4）樣品請置于1.5ml管中，管上注明樣品名稱、濃度以及制備時間，管口使用Parafilm封口。建議使用干冰運輸，并且盡量選用較快的郵遞方式，以降低運輸過程中樣品降解的可能性。廣東高通量轉錄組學主要技術轉錄學組測序能夠提供更普遍的檢測范圍。

轉錄組分析是目前應用比較廣的高通量測序分析技術之一。常見設計是不同樣品之間比較，尋找差異基因、標志基因、協同變化基因、差異剪接和新轉錄本，并進行結果可視化、功能注釋和網絡分析等。轉錄組的測序分析也相對成熟，從RNA提取、構建文庫、上機測序再到結果解析既可以自己完成，又可以在專業公司進行。概括來看轉錄組的分析流程比較簡單，序列比對-轉錄本拼接(可選)-表達定量-差異基因-功能富集-定制分析。整個環節清晰流暢，可以作為剛開始接觸高通量測序學習比較合適的技術之一。

轉錄組學為什么原核物種只能做有參轉錄組分析？由于原核生物的基因組中存在大量基因重疊區域、操縱子及多順反子，如果按照無參轉錄組分析策略進行組裝的話，難度較大，組裝結果存在較大風險。轉錄組學差異基因數目多少比較合理？不同的處理，不同的研究目標，差異基因的數目是不同的，從幾十個到幾千個都有可能。但是如果差異基因數目是個位數或者上萬，那么就需要和分析人員溝通一下，查一查是否有問題。轉錄組學差異基因太多，注釋信息太雜亂，怎么挑選目標基因？對不同的差異組合進行維恩圖分析，挑選共有或者特有的差異基因作為后續的研究對象；根據前人的文獻報道，挑選相關差異基因，不要局限在自己研究的物種上。轉錄組學測序樣品純度要求，OD值應在1.8至2.2之間。

轉錄組學測序結果的影響因素？RNA的降解嚴重影響測序的質量，RNA降解后，加入poly-A后無法捕獲純化mRNA，因此，隨機引物反轉錄無法得到全部的cDNA，導致測序結果出現明顯的3‘-和5’-偏向。文庫中的poly-A多聚物的存在會對測序信號產生干擾，影響測序結果的準確性；同時由于轉錄組中轉錄本的豐度不一致，實驗前需要對樣本進行均一化處理，否則高豐度的表達基因會掩蓋低豐度表達基因，導致尋找新基因失敗或者是獲得大量無意義的重復序列。轉錄組學無需了解物種基因信息，能夠直接對任何物種進行轉錄組分析。廣東高通量轉錄組學主要技術

什么是轉錄組學測序？武漢高通量轉錄組學技術服務

什么是轉錄組學測序？轉錄組廣義上指在某一生理條件下，細胞內所有轉錄組產物的組合，包括：mRNA、ncRNA、rRNA等；狹義上指所有mRNA的組合。轉錄組測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA的總和，主要包括mRNA和ncRNA。轉錄組具有時間特異性、組織特異性、空間特異性等特點。無參轉錄組和有參轉錄組的區別？如果所研究的物種有組裝注釋質量較好基因組序列，且和該基因組序列比對效率較高，那么可以采用有參轉錄組的分析策略，直接進行分析。反之，則需要按照無參轉錄組的分析策略進行轉錄本組裝，構建unigene庫，然后進行后續分析。武漢高通量轉錄組學技術服務

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