這些常用免疫組織化學方法的原理如下：

1. 免疫熒光細胞化學技術

將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當抗原抗體復合物中的熒光素受激發光的照射后會發出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量.

2. 免疫酶細胞化學技術

是免疫組織化學研究中較好常用的技術．基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞或組織內的相應抗原進行定位或定性研究．

3. 免疫膠體金技術

就是用膠體金標記一抗，二抗或其他的能特異性的結合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對組織或細胞內的抗原進行定性，定位或定量研究．由于膠體金的電子密度高，多用于免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究

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免疫膠體金技術

免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩定地吸附蛋白，對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對組織或細胞內的抗原進行定性、定位，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術特別適合于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進行光鏡觀察。如應用銀加強的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。

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織材料的處理

  組織材料的處理是獲得良好免疫組織化學結果的前提，必需保證要檢測的細胞或組織取材新鮮，固定及時，形態保存完好，抗原物質的抗原性不丟失、不擴散和被破壞（下節 詳述）。

  三、免疫染色

  可在細胞涂片或組織切片上進行免疫染色。一般程序是：①標記抗體與標本中抗原反應結合；②用PBS洗去未結合的成分；③直接觀察結果（免疫熒光直接法）；或顯色后再用顯微鏡觀察（免疫酶直接法）。在此基礎上發展出間接法，多層法，雙標記法等各種方法，將在本書各有關章 節 內詳述。

封片

為了長期保存，我們一般用中性樹膠等封片，避免產生氣泡，方法是直接在載玻片組織上滴一滴封片液，然后一手拿住蓋片某一拐角，而另一手拿對面的那個拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接觸到液體時為止；當發現液體接觸面在不斷彌散時，則可以緩慢降低另一拐角，這樣一般不會產生氣泡。免疫熒光方法中的重要環節

1）冰凍切片制備

建議用新鮮組織，否則組織細胞內部結構破壞，易使抗原彌散。選用干凈鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等，防止裂片和脫片嚴重。

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眾所周知，冰凍切片較突出的優點就是能夠較完好地保存抗原的免疫活性  ，即具有抗原敏感性高的優點  。因此對冰凍切片通常不進行抗原修復 ，而在作免疫組化的研究時往往需要對組織進行固定，固定液（如多聚甲醛、福爾馬林）使組織中的許多氨基酸殘基在分子內或分子間形成醛鍵，使得不少抗原決定簇被封閉。同時，由于甲醛的聚合作用，使蛋白分子間相互交聯形成大分子網絡，也導致了抗原有一定的封閉作用  ，從而降低了抗原敏感性。考慮到以上原因，我們對冰凍切片進行高溫高壓抗原修復并作對比研究。高通量轉錄組測序找融享生物。山西免疫組化服務

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DAB顯色

背景的深淺和特異性染色的深淺均可以由DAB孵育條件決定。DAB顯色時間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時間，到出現特異性染色較強而本底著色較淺時即可沖洗；DAB顯色時間很短（如幾秒或幾十秒）就出現很深的棕褐色，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長，需要下調抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間；此外，若很短時間就出現背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長封閉時間；DAB顯色時間很長（如超過十幾分鐘）才出現陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短（比較好一抗4℃過夜）；另一方面就是封閉時間過長。

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