陰性染色產(chǎn)生的原因有:

⑴一抗和二抗?jié)舛炔缓线m或孵育條件不妥。

⑵熒光素提前衰退。熒光素質(zhì)量不佳或操作過(guò)程中沒(méi)有注意避光等防止熒光素衰退的事項(xiàng)。

⑶血清封閉時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

⑷抗體稀釋液PH值不合適，影響抗原抗體反應(yīng)。

⑸組織切片不平、裂片或脫片很?chē)?yán)重，易引起大塊陰性著色。

⑹組織標(biāo)本不新鮮或已經(jīng)冷凍組織制成的切片中抗原易彌散，易引起本來(lái)表達(dá)的部位陰性染色或弱著色。

⑺熒光顯微鏡不會(huì)使用，激發(fā)波長(zhǎng)選擇錯(cuò)誤。

免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理--抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry)。 轉(zhuǎn)錄組找上海融享生物而科技有限公司。浙江病理切片免疫組化公司電話

減少或消除非特異性染色的方法  組織中非抗原抗體反應(yīng)出現(xiàn)的陽(yáng)性染色稱為非特異性背景染色，較好常見(jiàn)的原因是蛋白吸附于高電荷的膠元和結(jié)締組織成分上。有效方法是在用首先抗體前加制備第二抗體動(dòng)物之非免疫血清（1：5-1：20）封閉組織上帶電荷基團(tuán)而除去與首先抗體非特異性結(jié)合。必要時(shí)可加入2%-5%牛血清白蛋白，可進(jìn)一步減少非特異性染色。作用時(shí)間為10-20min。也可用除制備首先抗體以外的其它動(dòng)物血清（非免疫的）。有明顯溶血的血清不能用，以免產(chǎn)生非特異性染色。免疫熒光染色時(shí)，可用0.01%伊文氏蘭(PBS溶液)稀釋熒光抗體,對(duì)消除背景的非特異性熒光染色有很好的效果。當(dāng)然使用特異性高、效價(jià)高的首先抗體是較好重要的條件。洗滌用的緩沖液中加入0.85%~1%NaCl成為高鹽溶液,充分洗滌切片,能有效的減少非特異性結(jié)合而減少背景染色。吉林動(dòng)物實(shí)驗(yàn)免疫組化檢查機(jī)構(gòu)上海轉(zhuǎn)錄組技術(shù)比較好的公司找融享生物。

染色免疫組化可以輔助病理診斷、指導(dǎo)、評(píng)估預(yù)后，所以在做免疫組化過(guò)程中的質(zhì)控問(wèn)題處理尤其重要［1］。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現(xiàn)及方法的改進(jìn)，特別是即用型試劑盒的出現(xiàn)，使抗體的標(biāo)記更加簡(jiǎn)便、快捷，更加規(guī)范化。免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化染色技術(shù)是一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)性很強(qiáng)的技術(shù)，任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題，都可以直接影響免疫組化結(jié)果，

【摘要】目的研究CEA免疫組化染色在檢測(cè)系膜微轉(zhuǎn)移及環(huán)周切緣(CRM)侵犯方面的價(jià)值。方法選取經(jīng)纖維結(jié)腸鏡及病理證實(shí)為直腸*病人40例，應(yīng)用大組織切片技術(shù)對(duì)術(shù)后標(biāo)本處理，分別行常規(guī)染色及CEA免疫組化染色，比較分析兩種染色方法在檢測(cè)系膜微轉(zhuǎn)移及CRM侵犯方面的價(jià)值。結(jié)果CEA染色檢測(cè)**浸潤(rùn)程度大于常規(guī)病理染色，差異有性（t=5.2**<0.001）

常用染色方法

根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法，親和組織化學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對(duì)某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗體）在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法較好常用。判定分析編輯

免疫組化染色（IHC）

免疫組化染色（IHC）

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果而言，免疫組化技術(shù)服務(wù)主要涉及抗體實(shí)驗(yàn)結(jié)果的描述與分析，圖片的確定與選取，相關(guān)數(shù)據(jù)的提供，上述工作是免疫組化工作的重點(diǎn)內(nèi)容，只有嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)操作，專業(yè)化的結(jié)果分析才能更好的滿足客戶的要求，這點(diǎn)對(duì)于形式為腹水，上清，培養(yǎng)液之類的抗體顯得更為重要。關(guān)于上述服務(wù)內(nèi)容應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前由雙方明確，一般而言，客戶方實(shí)驗(yàn)前應(yīng)提出需要什么樣的結(jié)果與分析，例如是簡(jiǎn)要還是詳細(xì)的描述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，需要實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)否，圖片的數(shù)量與規(guī)格等。如果為雙盲試驗(yàn)或有第三方參與，則事先申明。

融享生物免疫組化致力于生物領(lǐng)域的科研服務(wù)。

石蠟切片由于在制作過(guò)程中使用大量有機(jī)溶劑（酒精、二甲苯）和（或）包埋過(guò)程中加熱處理使抗原活性喪失，所以通常采用抗原修復(fù)方法來(lái)提高石蠟切片免疫組化反應(yīng)的敏感性。而對(duì)于冰凍切片的制作由于不經(jīng)過(guò)上述過(guò)程，在以往的研究中通常不再經(jīng)過(guò)抗原修復(fù)而直接做免疫組化。但用冰凍切片做免疫組化研究時(shí)通常采用多聚甲醛固定，眾所周知多聚甲醛對(duì)抗原有封閉作用，并且在神經(jīng)系統(tǒng)中由于抗原表達(dá)量較微量，造成免疫組化染色中需要配制較高濃度的抗體工作液，造成抗體消耗較大，染色效果不佳。因此本文采用抗原修復(fù)和不修復(fù)兩組切片進(jìn)行免疫組化染色，比較免疫反應(yīng)敏感程度，以期進(jìn)一步提高免疫組化反應(yīng)的敏感***理實(shí)驗(yàn) 免疫熒光,HE染色，病理切片，蠟塊包埋等服務(wù)實(shí)驗(yàn)找上海融享生物更專業(yè)。天津組織免疫組化染色

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    非特異性染色彌散性均勻）2．組織切片制作過(guò)程的影響①固定不良—非特異性染色，顯示不均。②邊緣干燥—非特異性染色（常見(jiàn)），加抗體時(shí)勿干片。3．人工假象與特異性結(jié)果顯示不在同一平面上。陽(yáng)性對(duì)照：用已知抗原陽(yáng)性的切片與待檢標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色。對(duì)照切片呈陽(yáng)性結(jié)果，標(biāo)為陽(yáng)性對(duì)照。陰性對(duì)照：用確證不含已知抗原的標(biāo)本作對(duì)照，應(yīng)呈陰性結(jié)果，稱陰性對(duì)照。其實(shí)這只是陰性對(duì)照中的一種，陰性對(duì)照還應(yīng)包括空白、替代、吸收和***實(shí)驗(yàn)。▲染色失敗的幾種原因：（1）所染的全部切片均為陰性結(jié)果，包括陽(yáng)性對(duì)照在內(nèi)。全部（－）原因可能：①染色未完全嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行；②漏加一種抗體，或抗體失效；③緩沖液內(nèi)含疊氮化鈉，***了酶的活性；④底物中所加H2O2量少或失效；⑤復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)（2）所有切片均呈陽(yáng)性反應(yīng)，原因可能是：①切片在染色過(guò)程中抗體過(guò)濃，或干燥了。②緩沖液配置中未加氯化鈉和PH值不準(zhǔn)確，洗滌不徹底。③使用已變色的呈色底物溶液，或呈色反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。④抗體溫育的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。⑤H2O2濃度過(guò)高，呈色速度過(guò)快。粘附劑太厚。（3）所有切片背景過(guò)深，原因可能是：①未加酶消化處理切片。②切片或涂片過(guò)厚。③漂洗不夠。浙江病理切片免疫組化公司電話